反转录的基本步骤
@乜吕1976：反转录 - 搜狗百科
哈看15231308788…… [答案] 你按照买的反转录试剂盒来做就行.(1)、从细胞中提取细胞总RNA用GIBCO公司的Trizol试剂提取细胞总RNA.按试剂使用说明操作:离心收集细胞,倾去细胞液,向沉淀中加1 ml Trizo1(每106-107细胞),混匀至室温5分钟,用1 ml加...
@乜吕1976：反转录法获得目的基因的过程? - 作业帮
哈看15231308788…… [答案] 1.mRNA的纯化 2.cDNA第一链的合成 3.cDNA第二链的合成 4.cDNA克隆 5.将重组体导入宿主细胞 6.cDNA文库的鉴定 7.目的cDNA克隆的分离和鉴定 大概就这7个过程把.
@乜吕1976：RNA逆转录的具体过程是怎样的?是先转出互补的RNA链,还是先转出DNA? - 作业帮
哈看15231308788…… [答案] 更正一下tchxb的答案: 先转出与RNA互补的DNA单链,后转出双链DNA RNA首先反转录成cDNA(负链DNA),构成RNA-DNA中间体.中间体中的RNA再经过RNA酶H水解,而以剩下的负链DNA复制成双股DNA. tchxb的答案基本上是对的.
@乜吕1976：病毒RNA的反转录步骤 - 作业帮
哈看15231308788…… [答案] RNA → DNA → RNA → 蛋白质 逆转录 (解旋) 转录 翻译
@乜吕1976：由mRNA反转录形成cDNA的过程大致分为哪些步骤? - 作业帮
哈看15231308788…… [答案] 在PCR仪中,95度变性,72度延伸,Tm温度退火,来回30-35个循环,最后4度,就能得到反转录的cDNA.
@乜吕1976：mRNA反转录形成cDNA的过程是怎样的 -
哈看15231308788…… 有反转录酶,可以以RNA为模版合成DNA.这过程需要引物,根据mRNA有3'polyA尾巴的特点,可以用oligo-dT作为引物,合成cDNA,这样可以自然去除非mRNA的RNA的转录.也可以用随机引物去合成大量不同的cDNA.如果要反转录特定的mRNA,就根据它设计特异性引物反转录,这样理论上只有目的cDNA产生.
@乜吕1976：RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?请教 -
哈看15231308788…… 操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水 65C反应10min,冰上放置5min后:这一步是让RNA变性,把RNA的二级结构打开; 再加dNTP,RNaseA,BUFFER, MTV逆转录酶, 反应25℃10min:这一步是让反转录引物(oligodT,随机引物)和模板RNA退火结合 37℃60min:这一步是反转录酶的工作温度 70℃10min:这一步是变性,把合成的cDNA和RNA变性开,就拿到单链的cDNA
@乜吕1976：RNA反转录为cDNA 原理 主要想知道各个水浴、冰浴步骤在实验中的作用RNA反转录过程步骤如下:将提取的RNA用DEPC水吹起,加入引物1、引物2,加... - 作业帮
哈看15231308788…… [答案] 第一次70度水浴5min为让RNA二级结构打开,便于引物结合. 第一次冰浴1min为了退火,让引物能够结合RNA. 37度水域是让cDNA聚合. 第二次70℃水浴是再变性,让引物脱离模板RNA和cDNA第一链. 第二次冰浴是为了让cDNA-RNA复性成为cDNA-...
@乜吕1976：论述反转录法提取目的基因的全过程 -
哈看15231308788…… 以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA(cDNA),然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获取所需的基因.是基因工程中提取目的基因的重要方法之一.优缺点 优点:该方法专一性强,目的基因不含内含子,可合成自然界不存在的新基因.缺点:操作复杂,形成的mRNA为单链,生存时间短,很不稳定,要求的技术条件也较高.因为直接从生物体中提取的基因的编码区是不连续的有不编码蛋白质的内含子部分,而反转录来的cDNA的编码区是连续的(成熟mRNA中的序列都是由基因的编码区的外显子部分转录来的),为了节省目的基因片段的长度,选择cDNA为目的基因.
哈看15231308788…… [答案] 你按照买的反转录试剂盒来做就行.(1)、从细胞中提取细胞总RNA用GIBCO公司的Trizol试剂提取细胞总RNA.按试剂使用说明操作:离心收集细胞,倾去细胞液,向沉淀中加1 ml Trizo1(每106-107细胞),混匀至室温5分钟,用1 ml加...
@乜吕1976：反转录法获得目的基因的过程? - 作业帮
哈看15231308788…… [答案] 1.mRNA的纯化 2.cDNA第一链的合成 3.cDNA第二链的合成 4.cDNA克隆 5.将重组体导入宿主细胞 6.cDNA文库的鉴定 7.目的cDNA克隆的分离和鉴定 大概就这7个过程把.
@乜吕1976：RNA逆转录的具体过程是怎样的?是先转出互补的RNA链,还是先转出DNA? - 作业帮
哈看15231308788…… [答案] 更正一下tchxb的答案: 先转出与RNA互补的DNA单链,后转出双链DNA RNA首先反转录成cDNA(负链DNA),构成RNA-DNA中间体.中间体中的RNA再经过RNA酶H水解,而以剩下的负链DNA复制成双股DNA. tchxb的答案基本上是对的.
@乜吕1976：病毒RNA的反转录步骤 - 作业帮
哈看15231308788…… [答案] RNA → DNA → RNA → 蛋白质 逆转录 (解旋) 转录 翻译
@乜吕1976：由mRNA反转录形成cDNA的过程大致分为哪些步骤? - 作业帮
哈看15231308788…… [答案] 在PCR仪中,95度变性,72度延伸,Tm温度退火,来回30-35个循环,最后4度,就能得到反转录的cDNA.
@乜吕1976：mRNA反转录形成cDNA的过程是怎样的 -
哈看15231308788…… 有反转录酶,可以以RNA为模版合成DNA.这过程需要引物,根据mRNA有3'polyA尾巴的特点,可以用oligo-dT作为引物,合成cDNA,这样可以自然去除非mRNA的RNA的转录.也可以用随机引物去合成大量不同的cDNA.如果要反转录特定的mRNA,就根据它设计特异性引物反转录,这样理论上只有目的cDNA产生.
@乜吕1976：RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?请教 -
哈看15231308788…… 操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水 65C反应10min,冰上放置5min后:这一步是让RNA变性,把RNA的二级结构打开; 再加dNTP,RNaseA,BUFFER, MTV逆转录酶, 反应25℃10min:这一步是让反转录引物(oligodT,随机引物)和模板RNA退火结合 37℃60min:这一步是反转录酶的工作温度 70℃10min:这一步是变性,把合成的cDNA和RNA变性开,就拿到单链的cDNA
@乜吕1976：RNA反转录为cDNA 原理 主要想知道各个水浴、冰浴步骤在实验中的作用RNA反转录过程步骤如下:将提取的RNA用DEPC水吹起,加入引物1、引物2,加... - 作业帮
哈看15231308788…… [答案] 第一次70度水浴5min为让RNA二级结构打开,便于引物结合. 第一次冰浴1min为了退火,让引物能够结合RNA. 37度水域是让cDNA聚合. 第二次70℃水浴是再变性,让引物脱离模板RNA和cDNA第一链. 第二次冰浴是为了让cDNA-RNA复性成为cDNA-...
@乜吕1976：论述反转录法提取目的基因的全过程 -
哈看15231308788…… 以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA(cDNA),然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获取所需的基因.是基因工程中提取目的基因的重要方法之一.优缺点 优点:该方法专一性强,目的基因不含内含子,可合成自然界不存在的新基因.缺点:操作复杂,形成的mRNA为单链,生存时间短,很不稳定,要求的技术条件也较高.因为直接从生物体中提取的基因的编码区是不连续的有不编码蛋白质的内含子部分,而反转录来的cDNA的编码区是连续的(成熟mRNA中的序列都是由基因的编码区的外显子部分转录来的),为了节省目的基因片段的长度,选择cDNA为目的基因.
