多聚甲醛固定细胞步骤
@拔芬2948：做流式细胞仪之前,如何固定细胞? - 作业帮
言霍15992309118…… [答案] 一 般来说都是将细胞悬液离心并弃上清后加入固定液,我们加的是70%的冰乙醇,加的量根据你细胞的多少.你这个涉及的测蛋白,那么加多聚甲醛的量和时间可能 要控制得严一些才能保证最低限度不破坏a-SMA的结构.如果单测细胞凋亡和周期的话...
@拔芬2948：多聚甲醛固定细胞爬片37度要多久 -
言霍15992309118…… 4度冰箱存放的时间一般不超过1个月,而且得因细胞的抗原性而异,有的细胞涂片,如病毒感染的细胞,都不宜放在4℃.建议最好放在-20℃,要存放更长时间的应放在-80℃.用时再取出,于室温自然解冻.
@拔芬2948：细胞爬片具体步骤是什么? -
言霍15992309118…… 单位实验室做过,小编顺便推荐一下细胞爬片是从上海晶安生物公司买的,实验效果不错. 细胞免疫荧光步骤: 1.细胞爬片;首先是玻片的处理,普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块,先用洗衣粉洗干净,用水冲静烤干,然后泡酸过...
@拔芬2948：做免疫荧光,HE染色,电镜,组织怎么固定 -
言霍15992309118…… 1. 配制10%多聚甲醛:称取多聚甲醛20g于250 mL三角锥形瓶中,加入200 mL蒸馏水,加热至55℃左右,充分搅拌使粉末完全溶解. 2. 向锥形瓶中逐滴滴加0.1 mol/L氢氧化钠水溶液至多聚甲醛水溶液恰好澄清. 3. 配制4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4):100 mL 0.2 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.4)+80 mL 10%多聚甲醛水溶液+20 mL蒸馏水充分混匀,调节pH至7.4. 4. 将大鼠的肌肉组织切成尽量小的组织块(1mm3左右),浸泡在4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4)中进行固定,固定时间不超过12h.
@拔芬2948：细胞免疫荧光怎么封片 -
言霍15992309118…… 细胞免疫荧光的详细操作步骤 1,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍.注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心. 2,4%多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍. 3,0.2%Triton X 100通透10分钟,PBS洗三遍. 4, 与二抗相同宿主的血清封闭30分钟,PBS洗三遍. 5.,一抗4度湿盒内过夜,也可37度2小时,感觉前者效果好,PBS洗三遍. 6,二抗室温2小时,或者37度1半小时,PBS洗三遍. 7,最好用DAPI染核,然后直接照荧光片. 8,蒸馏水洗掉PBS,甘油封片,指甲油封片子的四周.
@拔芬2948：L - 多聚赖氨酸包被细胞爬片免疫荧光步骤 -
言霍15992309118…… 第一天:1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min;3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);4. PBS浸洗...
@拔芬2948：请问用hoechst33258可以和PI进行双染可以吗? -
言霍15992309118…… 博凌科为解答:当然可以.以下步骤供参考:1、向细胞中加入用0.01MPBS溶解的Hoechst33342,终浓度为10g/ml,37℃反应10min;2、继续加入用0.01MPBS溶解的PI,使它的终浓度为10g/ml,4℃反应20min;3、直接加入4%多聚甲醛固定液,与培养液按1:3混合,固定细胞10min;4、取出圆形载玻片,50%甘油封片.
@拔芬2948：基质胶上怎样做细胞免疫荧光试验 -
言霍15992309118…… 免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种.它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术. 操作步骤: 1.细胞铺板:将细胞以合适的密度(注意:一般情况下...
@拔芬2948：什么是细胞爬片的固定,就是在细胞爬片上加入乙醇 -
言霍15992309118…… 是加多聚甲醛的,4%多聚甲醛,室温固定15min,再用冰的PBS洗三遍.这样可以长期在4摄氏度冰箱保存,然后用来做免疫荧光之类的.不是乙醇哦.
@拔芬2948：细胞爬片盖玻片如何处理? -
言霍15992309118…… 单位老师统一订的晶安生物12孔板细胞爬片,拆开即用,较为方便.
言霍15992309118…… [答案] 一 般来说都是将细胞悬液离心并弃上清后加入固定液,我们加的是70%的冰乙醇,加的量根据你细胞的多少.你这个涉及的测蛋白,那么加多聚甲醛的量和时间可能 要控制得严一些才能保证最低限度不破坏a-SMA的结构.如果单测细胞凋亡和周期的话...
@拔芬2948：多聚甲醛固定细胞爬片37度要多久 -
言霍15992309118…… 4度冰箱存放的时间一般不超过1个月,而且得因细胞的抗原性而异,有的细胞涂片,如病毒感染的细胞,都不宜放在4℃.建议最好放在-20℃,要存放更长时间的应放在-80℃.用时再取出,于室温自然解冻.
@拔芬2948：细胞爬片具体步骤是什么? -
言霍15992309118…… 单位实验室做过,小编顺便推荐一下细胞爬片是从上海晶安生物公司买的,实验效果不错. 细胞免疫荧光步骤: 1.细胞爬片;首先是玻片的处理,普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块,先用洗衣粉洗干净,用水冲静烤干,然后泡酸过...
@拔芬2948：做免疫荧光,HE染色,电镜,组织怎么固定 -
言霍15992309118…… 1. 配制10%多聚甲醛:称取多聚甲醛20g于250 mL三角锥形瓶中,加入200 mL蒸馏水,加热至55℃左右,充分搅拌使粉末完全溶解. 2. 向锥形瓶中逐滴滴加0.1 mol/L氢氧化钠水溶液至多聚甲醛水溶液恰好澄清. 3. 配制4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4):100 mL 0.2 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.4)+80 mL 10%多聚甲醛水溶液+20 mL蒸馏水充分混匀,调节pH至7.4. 4. 将大鼠的肌肉组织切成尽量小的组织块(1mm3左右),浸泡在4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4)中进行固定,固定时间不超过12h.
@拔芬2948：细胞免疫荧光怎么封片 -
言霍15992309118…… 细胞免疫荧光的详细操作步骤 1,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍.注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心. 2,4%多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍. 3,0.2%Triton X 100通透10分钟,PBS洗三遍. 4, 与二抗相同宿主的血清封闭30分钟,PBS洗三遍. 5.,一抗4度湿盒内过夜,也可37度2小时,感觉前者效果好,PBS洗三遍. 6,二抗室温2小时,或者37度1半小时,PBS洗三遍. 7,最好用DAPI染核,然后直接照荧光片. 8,蒸馏水洗掉PBS,甘油封片,指甲油封片子的四周.
@拔芬2948：L - 多聚赖氨酸包被细胞爬片免疫荧光步骤 -
言霍15992309118…… 第一天:1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min;3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);4. PBS浸洗...
@拔芬2948：请问用hoechst33258可以和PI进行双染可以吗? -
言霍15992309118…… 博凌科为解答:当然可以.以下步骤供参考:1、向细胞中加入用0.01MPBS溶解的Hoechst33342,终浓度为10g/ml,37℃反应10min;2、继续加入用0.01MPBS溶解的PI,使它的终浓度为10g/ml,4℃反应20min;3、直接加入4%多聚甲醛固定液,与培养液按1:3混合,固定细胞10min;4、取出圆形载玻片,50%甘油封片.
@拔芬2948：基质胶上怎样做细胞免疫荧光试验 -
言霍15992309118…… 免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种.它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术. 操作步骤: 1.细胞铺板:将细胞以合适的密度(注意:一般情况下...
@拔芬2948：什么是细胞爬片的固定,就是在细胞爬片上加入乙醇 -
言霍15992309118…… 是加多聚甲醛的,4%多聚甲醛,室温固定15min,再用冰的PBS洗三遍.这样可以长期在4摄氏度冰箱保存,然后用来做免疫荧光之类的.不是乙醇哦.
@拔芬2948：细胞爬片盖玻片如何处理? -
言霍15992309118…… 单位老师统一订的晶安生物12孔板细胞爬片,拆开即用,较为方便.
