流式细胞术pi染色
@于陶5694：PI 染色操作步骤 -
党沾15247022304…… 去百度文库,查看完整内容> 内容来自用户:唐韵茹sharon PI 染色操作步骤 1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中,离心,1500rpm , 5min,弃上清液. 2、加入PBS 1ml离心洗涤1次,弃上清. 3、加入2ml预冷的70%酒精,4℃固定30min,...
@于陶5694：请教流式细胞术PI染色进行细胞周期分析的原理 -
党沾15247022304…… 博凌科为解答:PI ,即碘化丙锭,可以与细胞内DNA 和RNA 结 合,采用RNA 抑制剂将RNA 消化后,通过流式细胞术检测 到的与DNA 结合的PI 的荧光强度直接反映了细胞内DNA 含量的多少.由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常 正常...
@于陶5694：请教流式细胞术PI染色进行细胞周期分析的原理 -
党沾15247022304…… 实验原理:流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室.在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱.通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测,得到该细胞的光散射和荧光指标,分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征.细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化,如G0/G1期的DNA含量为2C,而G2期的DNA含量是4C.利用PI标记的方法,通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定,可分析细胞周期各时相的百分比.
@于陶5694：流式细胞仪测DNA含量具体步骤怎么调 -
党沾15247022304…… 第二个峰是正常的肝细胞. 比如下面这个图,是正常细胞的1,做的是肝癌患者活检后的检查,比如PI染色.第三个峰是DNA含量多于正常细胞(也就是癌细胞流式细胞仪测DNA含量具体步骤怎么调流式检测DNA含量,是通过DNA荧光染料,然后和已知DNA含量的商品化标准品(比如鸡红细胞)比对,得到含量.横坐标代表的是DNA染色后的相对荧光强度,是正在分裂的正常细胞处于G2期,纵坐标是细胞计数,最后一个峰.第一个峰是鸡红细胞.2倍)
@于陶5694：流式细胞仪检测细胞凋亡,单染可以检测出细胞凋亡率吗? -
党沾15247022304…… 用PI单染就可以,PI是用来测细胞周期的,在单倍体峰前如果有个亚峰则表明有凋亡,但是这个方法不是很好,坏死细胞也会包含在内.准确地说用PI单染测出的凋亡率应该是死亡细胞占细胞总数的比例.建议用AnexinV和PI双染,PI阴性和AnexinV阳性区是真正凋亡的细胞.细胞早期凋亡时,内膜外翻,位于胞浆的磷脂酰丝氨酸转位至细胞表面,FITC标记的Anexin V能与其结合,而坏死细胞不具有该特点.
@于陶5694：流式细胞术PI染色求助 -
党沾15247022304…… 不知道你具体问什么,先参考一下我前面对PI的这个回答吧:PI 是 propidium iodide的缩写,该染料能和核酸链结合后,被激发发出荧光.其实并不是检测凋亡,而是检测的细胞膜的完整性.完整的细胞膜对PI没有通透性,PI不能进入细胞内和核酸结合,所以细胞不能被染色.只有细胞发生了凋亡,或者坏死,或者人为因素,比如胰酶消化,吹打,刮取等等操作,损伤了细胞膜.这样的细胞就会被染色了.所以PI本身并不是一个用来显示凋亡的特异性的染料.假阳性很多.一般最多用来做初步筛选,如果要确认确实是凋亡的话,需要其他方法.PI的目的就是判断细胞膜的损伤,和凋亡并不是对应关系.
@于陶5694：怎样利用PI单染色法进行流式细胞仪检测细胞凋亡 -
党沾15247022304…… PI 单染并不是很好的看凋亡的方法.一般可以作为早期的筛选实验,因为特异性不好方法和做细胞周期是一样的,你可以查一下做细胞周期的实验方法,我这里就不贴了.几点注意:1. 一定要设置单细胞gate,以防多聚细胞核杂质的干扰 2. RNA酶不要忘记了 3. 固定时间半小时足以,千万不要在酒精中过夜,不然会产生大量碎片
@于陶5694：流式细胞仪怎么测细胞核1n,2n和4n -
党沾15247022304…… 细胞固定(一般用酒精)后,用PI染色.上机,先用FSC、SSC散点图gate出细胞,排除掉碎片.然后显示细胞到以PI染色为横坐标的柱状图,线性比例.下面这个图就是一个代表:细胞被放射线照射后发生变异,第一个峰是1n, 第二个是2n, 第三个是4n..
@于陶5694：流式检测细胞周期都有哪些染色方法 -
党沾15247022304…… 从分类上来说,一般有两类:第一类是只染DNA.这类方法比较简单,用酒精固定细胞后,直接加含有RNA酶的荧光染料,比如PI等,然后就可以直接上机. 第二类另外加了一个步骤,在细胞培养液中加入核苷酸的模拟物,比如BrdU或者EdU.细胞新合成的DNA上就会有这些物质.在不同时间点收集细胞,用DNA染料染DNA的同时,还以用抗体或者化学发光法染核苷酸模拟物也发荧光.这个方法的有点就是不仅可以像第一类方法一样,看到处于细胞周期各个期的百分率,另外还可以看到有多少DNA是新合成的.是一个动态的过程.
@于陶5694：怎么分析pi staining 细胞周期 -
党沾15247022304…… PI单染检测细胞周期 原理: 碘化丙啶(Propidium ,简称PI)是一种双链DNA的荧光染料.碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比.细胞内的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行...
党沾15247022304…… 去百度文库,查看完整内容> 内容来自用户:唐韵茹sharon PI 染色操作步骤 1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中,离心,1500rpm , 5min,弃上清液. 2、加入PBS 1ml离心洗涤1次,弃上清. 3、加入2ml预冷的70%酒精,4℃固定30min,...
@于陶5694：请教流式细胞术PI染色进行细胞周期分析的原理 -
党沾15247022304…… 博凌科为解答:PI ,即碘化丙锭,可以与细胞内DNA 和RNA 结 合,采用RNA 抑制剂将RNA 消化后,通过流式细胞术检测 到的与DNA 结合的PI 的荧光强度直接反映了细胞内DNA 含量的多少.由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常 正常...
@于陶5694：请教流式细胞术PI染色进行细胞周期分析的原理 -
党沾15247022304…… 实验原理:流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室.在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱.通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测,得到该细胞的光散射和荧光指标,分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征.细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化,如G0/G1期的DNA含量为2C,而G2期的DNA含量是4C.利用PI标记的方法,通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定,可分析细胞周期各时相的百分比.
@于陶5694：流式细胞仪测DNA含量具体步骤怎么调 -
党沾15247022304…… 第二个峰是正常的肝细胞. 比如下面这个图,是正常细胞的1,做的是肝癌患者活检后的检查,比如PI染色.第三个峰是DNA含量多于正常细胞(也就是癌细胞流式细胞仪测DNA含量具体步骤怎么调流式检测DNA含量,是通过DNA荧光染料,然后和已知DNA含量的商品化标准品(比如鸡红细胞)比对,得到含量.横坐标代表的是DNA染色后的相对荧光强度,是正在分裂的正常细胞处于G2期,纵坐标是细胞计数,最后一个峰.第一个峰是鸡红细胞.2倍)
@于陶5694：流式细胞仪检测细胞凋亡,单染可以检测出细胞凋亡率吗? -
党沾15247022304…… 用PI单染就可以,PI是用来测细胞周期的,在单倍体峰前如果有个亚峰则表明有凋亡,但是这个方法不是很好,坏死细胞也会包含在内.准确地说用PI单染测出的凋亡率应该是死亡细胞占细胞总数的比例.建议用AnexinV和PI双染,PI阴性和AnexinV阳性区是真正凋亡的细胞.细胞早期凋亡时,内膜外翻,位于胞浆的磷脂酰丝氨酸转位至细胞表面,FITC标记的Anexin V能与其结合,而坏死细胞不具有该特点.
@于陶5694：流式细胞术PI染色求助 -
党沾15247022304…… 不知道你具体问什么,先参考一下我前面对PI的这个回答吧:PI 是 propidium iodide的缩写,该染料能和核酸链结合后,被激发发出荧光.其实并不是检测凋亡,而是检测的细胞膜的完整性.完整的细胞膜对PI没有通透性,PI不能进入细胞内和核酸结合,所以细胞不能被染色.只有细胞发生了凋亡,或者坏死,或者人为因素,比如胰酶消化,吹打,刮取等等操作,损伤了细胞膜.这样的细胞就会被染色了.所以PI本身并不是一个用来显示凋亡的特异性的染料.假阳性很多.一般最多用来做初步筛选,如果要确认确实是凋亡的话,需要其他方法.PI的目的就是判断细胞膜的损伤,和凋亡并不是对应关系.
@于陶5694：怎样利用PI单染色法进行流式细胞仪检测细胞凋亡 -
党沾15247022304…… PI 单染并不是很好的看凋亡的方法.一般可以作为早期的筛选实验,因为特异性不好方法和做细胞周期是一样的,你可以查一下做细胞周期的实验方法,我这里就不贴了.几点注意:1. 一定要设置单细胞gate,以防多聚细胞核杂质的干扰 2. RNA酶不要忘记了 3. 固定时间半小时足以,千万不要在酒精中过夜,不然会产生大量碎片
@于陶5694：流式细胞仪怎么测细胞核1n,2n和4n -
党沾15247022304…… 细胞固定(一般用酒精)后,用PI染色.上机,先用FSC、SSC散点图gate出细胞,排除掉碎片.然后显示细胞到以PI染色为横坐标的柱状图,线性比例.下面这个图就是一个代表:细胞被放射线照射后发生变异,第一个峰是1n, 第二个是2n, 第三个是4n..
@于陶5694：流式检测细胞周期都有哪些染色方法 -
党沾15247022304…… 从分类上来说,一般有两类:第一类是只染DNA.这类方法比较简单,用酒精固定细胞后,直接加含有RNA酶的荧光染料,比如PI等,然后就可以直接上机. 第二类另外加了一个步骤,在细胞培养液中加入核苷酸的模拟物,比如BrdU或者EdU.细胞新合成的DNA上就会有这些物质.在不同时间点收集细胞,用DNA染料染DNA的同时,还以用抗体或者化学发光法染核苷酸模拟物也发荧光.这个方法的有点就是不仅可以像第一类方法一样,看到处于细胞周期各个期的百分率,另外还可以看到有多少DNA是新合成的.是一个动态的过程.
@于陶5694：怎么分析pi staining 细胞周期 -
党沾15247022304…… PI单染检测细胞周期 原理: 碘化丙啶(Propidium ,简称PI)是一种双链DNA的荧光染料.碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比.细胞内的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行...
