蛋白原核表达原理
@彭盼2691：原核生物是如何进行基因表达的? -
乐世17661478299…… 1、Operon操纵子:一个或几个结构基因与一个调节基因和一个操纵基因,加上启动子构成一个操纵单元,这个单元称为操纵子.在操纵子中,结构基因产生mRNA并作为模板合成蛋白质;而调节基因则产生一种阻遏蛋白与操纵基因相互作用;...
@彭盼2691：真核生物蛋白如何在原核生物中表达 -
乐世17661478299…… 1.起始复合物形成所需的蛋白质因子的差异 原核生物起始因子主要有IF1,IF2,IF3等3种,而真核生物就目前所知,起始因子就有9种左右,其中eIF2由3个亚基组成,而elF4按其参与复合物的作用不同区分为4A,4B,4C,4E,4F.而形成的复合物4F称...
@彭盼2691：如何用基因工程法将人体内产生的一种蛋白质在细菌体内表达 -
乐世17661478299…… 这个叫做“原核表达”.首先你要有原核表达用载体,然后你要有该蛋白对应的cDNA序列,以此构建原核表达融合载体,最后将构建好的载体转入如BL21类的大肠杆菌菌株内,通过IPTG的方法诱导表达就可以了.
@彭盼2691：真核细胞表达和原核细胞表达有什么不同?他们表达产生的活性蛋白有什么不同?希望能够详细一点解答! -
乐世17661478299…… 首先得从细胞的结构说起:真核细胞具有各种胞内细胞器,而原核细胞却除核糖体之外不存在其他细胞器.这与基因的表达是密不可分的. 真核细胞的基因是有外显子和内含子组成的,而原核细胞却无此之分.在细胞内DNA进行转录是都是从启动子开始,按照碱基互补配对原则依次进行.只是翻译产物会有所不同,真核细胞的翻译初产物,需要进行进一步的加工修剪,这就用到了内质网和高尔基体,通过细胞器的加工可以将内含子的翻译产物去掉.而原核细胞就简单的多了,只要按部就班的来就行,不需要修饰. 鉴于两者的不同,在做基因工程的时候原核细胞的DNA一般可以通用,而真核细胞DNA则必须进行修饰.
@彭盼2691：真核蛋白在原核体系转化表达 -
乐世17661478299…… 比如人造胰岛素, 过程是用限制性核酸内切酶把人mRNA反转录成的cDNA和大肠杆菌的质粒都切开并重组,然后放到大肠杆菌内,让其产生人胰岛素. 问题是人DNA有内含子,原核生物直接无法转录 解决方案是用mRNA 再反转录
@彭盼2691：真核生物的基因在原核生物中表达,大致采用什么路线? -
乐世17661478299…… 同意楼上的意见,不过,在原核生物中表达真核基因可以利用包含体的方法,直接将真核生物的基因克隆出来,通过载体或者是质粒转移到原核细胞中去,通过DNA翻译表达出来的蛋白质因为没有正确的空间折叠,所以不具备生物活性,只能分泌到细胞质中,形成包含体,工业上将细胞破碎后收集包含体,通过一系列方法使其空间结构发生变化,加入一系列配基的修饰,使其具有生物活性,重而达到复性的目的.
@彭盼2691：目的蛋白有跨膜区,在原核中怎样克隆表达 -
乐世17661478299…… 实际上真核胞蛋白表达系统来实现,而且效果往往更好. 用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速.如果希望表达和纯化的蛋白性质稳定,经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象,那么使用原核表达系统就很合适了.
@彭盼2691：真核基因在原核系统表达的主要步骤 -
乐世17661478299…… 获取目的基因…连接到T载体…测序…酶切切下粘性末端…再用同种酶切表达载体…载体与目的基因相连…转化到细菌…表达…提蛋白……但是一般真核基因弱要表达的蛋白三级结构较复杂…还需复杂的侧链结构…原核没有内质网…所以表达蛋白较简单…与原蛋白构像有差异…手机答题
@彭盼2691：如何确定一个蛋白选用真核表达还是原核表达、 - 作业帮
乐世17661478299…… [答案] 一般真核生物来源的蛋白质用真核表达,原核生物来源的用原核表达,因为真核生物和原核生物有密码子偏好,比如说同一个氨基酸可以由A和B两种密码子编码,真核生物偏好A,含有A的序列在真核中表达量较高,否则,含有B的序列表达量很低.
@彭盼2691：如何得到基因的原核表达蛋白,并通过免疫动物得到特异性抗体 -
乐世17661478299…… 要得到基因的原核表达蛋白,先要考虑表达的载体,pET系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统,已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白.一般的pET载体是先在不含DE3片段的菌株中进行克隆筛选,之后再把阳性克隆转化...
乐世17661478299…… 1、Operon操纵子:一个或几个结构基因与一个调节基因和一个操纵基因,加上启动子构成一个操纵单元,这个单元称为操纵子.在操纵子中,结构基因产生mRNA并作为模板合成蛋白质;而调节基因则产生一种阻遏蛋白与操纵基因相互作用;...
@彭盼2691：真核生物蛋白如何在原核生物中表达 -
乐世17661478299…… 1.起始复合物形成所需的蛋白质因子的差异 原核生物起始因子主要有IF1,IF2,IF3等3种,而真核生物就目前所知,起始因子就有9种左右,其中eIF2由3个亚基组成,而elF4按其参与复合物的作用不同区分为4A,4B,4C,4E,4F.而形成的复合物4F称...
@彭盼2691：如何用基因工程法将人体内产生的一种蛋白质在细菌体内表达 -
乐世17661478299…… 这个叫做“原核表达”.首先你要有原核表达用载体,然后你要有该蛋白对应的cDNA序列,以此构建原核表达融合载体,最后将构建好的载体转入如BL21类的大肠杆菌菌株内,通过IPTG的方法诱导表达就可以了.
@彭盼2691：真核细胞表达和原核细胞表达有什么不同?他们表达产生的活性蛋白有什么不同?希望能够详细一点解答! -
乐世17661478299…… 首先得从细胞的结构说起:真核细胞具有各种胞内细胞器,而原核细胞却除核糖体之外不存在其他细胞器.这与基因的表达是密不可分的. 真核细胞的基因是有外显子和内含子组成的,而原核细胞却无此之分.在细胞内DNA进行转录是都是从启动子开始,按照碱基互补配对原则依次进行.只是翻译产物会有所不同,真核细胞的翻译初产物,需要进行进一步的加工修剪,这就用到了内质网和高尔基体,通过细胞器的加工可以将内含子的翻译产物去掉.而原核细胞就简单的多了,只要按部就班的来就行,不需要修饰. 鉴于两者的不同,在做基因工程的时候原核细胞的DNA一般可以通用,而真核细胞DNA则必须进行修饰.
@彭盼2691：真核蛋白在原核体系转化表达 -
乐世17661478299…… 比如人造胰岛素, 过程是用限制性核酸内切酶把人mRNA反转录成的cDNA和大肠杆菌的质粒都切开并重组,然后放到大肠杆菌内,让其产生人胰岛素. 问题是人DNA有内含子,原核生物直接无法转录 解决方案是用mRNA 再反转录
@彭盼2691：真核生物的基因在原核生物中表达,大致采用什么路线? -
乐世17661478299…… 同意楼上的意见,不过,在原核生物中表达真核基因可以利用包含体的方法,直接将真核生物的基因克隆出来,通过载体或者是质粒转移到原核细胞中去,通过DNA翻译表达出来的蛋白质因为没有正确的空间折叠,所以不具备生物活性,只能分泌到细胞质中,形成包含体,工业上将细胞破碎后收集包含体,通过一系列方法使其空间结构发生变化,加入一系列配基的修饰,使其具有生物活性,重而达到复性的目的.
@彭盼2691：目的蛋白有跨膜区,在原核中怎样克隆表达 -
乐世17661478299…… 实际上真核胞蛋白表达系统来实现,而且效果往往更好. 用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速.如果希望表达和纯化的蛋白性质稳定,经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象,那么使用原核表达系统就很合适了.
@彭盼2691：真核基因在原核系统表达的主要步骤 -
乐世17661478299…… 获取目的基因…连接到T载体…测序…酶切切下粘性末端…再用同种酶切表达载体…载体与目的基因相连…转化到细菌…表达…提蛋白……但是一般真核基因弱要表达的蛋白三级结构较复杂…还需复杂的侧链结构…原核没有内质网…所以表达蛋白较简单…与原蛋白构像有差异…手机答题
@彭盼2691：如何确定一个蛋白选用真核表达还是原核表达、 - 作业帮
乐世17661478299…… [答案] 一般真核生物来源的蛋白质用真核表达,原核生物来源的用原核表达,因为真核生物和原核生物有密码子偏好,比如说同一个氨基酸可以由A和B两种密码子编码,真核生物偏好A,含有A的序列在真核中表达量较高,否则,含有B的序列表达量很低.
@彭盼2691：如何得到基因的原核表达蛋白,并通过免疫动物得到特异性抗体 -
乐世17661478299…… 要得到基因的原核表达蛋白,先要考虑表达的载体,pET系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统,已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白.一般的pET载体是先在不含DE3片段的菌株中进行克隆筛选,之后再把阳性克隆转化...
