37sds+co62m
@令饺5784：如何提高限制性酶切的反应效率 -
生残19174547893…… 1 DNA纯度 在DNA样品中若含有蛋白质,或没有去除干净制备过程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高浓度金属离子,均会降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用. 2 核酸内切限制酶的缓冲液 核酸内切限制酶的标准缓冲...
@令饺5784：提取大肠杆菌DNA时,裂解大肠杆菌最常采用的方法是什么?原理时什么? -
生残19174547893…… 最常用的办法是SDS法,在反应体系中加入终浓度约为1%的SDS37度水浴1小时就可以完成大肠杆菌的裂解.现在手提细菌的基因组DNA基本上就是这个办法,具体步骤在分子克隆和精编分子生物学实验指南上都有,是最经典的方法.SDS是一种阴离子去垢剂,能够破坏细菌的细胞壁和细胞膜.
@令饺5784：钻头中SDS+是什么意思 -
生残19174547893…… 碰巧知道这个.SDS表示免工具拆卸(Special_Direct_System),据说是BOSCH发明的,后面跟的英寸单位通常代表直径,有4坑道和5坑道设计,用X4或X5表示.也有用plus或max表示,SDS+(即SDS plus)表示四坑圆柄钻头, SDS Max 表示 五坑圆柄钻头,你想啊,原来的钻头都是用3条坑道固定,加一条就叫plus,5坑道就挺密了,快挤不下了,所以就用max表示了喔. 希望对你有帮助.
@令饺5784：western blot 转移缓冲液的配方? -
生残19174547893…… 转移缓冲液中不能含有sds的,sds会严重影响转印效果.
@令饺5784：急!在提革兰氏阳性菌基因组时加入蛋白酶K、溶菌酶和SDS的顺序是什么? -
生残19174547893…… 首先溶菌酶溶解细胞壁,使细胞破裂,因为细菌细胞无壁后易破裂,而且无核膜,所以不用加SDS破膜了. 然后蛋白酶K使多种蛋白质水解.蛋白酶K可在SDS存在下有活性. 再后SDS能使DNA和蛋白质分开. 蛋白酶K和溶菌酶不能一起加. SDS和酶K可以同时加. 也有某些文献是先加SDS再加酶K的,不过我还是建议按大多数的来,先酶K.更多的人都是同时加的.
@令饺5784：凝胶酶谱的SDS聚丙烯酰胺凝胶和western中的配制方法有什么区别? -
生残19174547893…… 凝胶酶谱的SDS-PAGE含0.1%明胶 配方: 分离胶 ddH2O 4.5ml 30%储备胶(0.8%甲叉+29.2%丙烯酰胺) 1.5mol/l Tris(PH 8.8) 10% SDS 10%过硫酸铵 TEMED 1%明胶(1g明胶-->100ml,37°C水浴溶解)0.5ml 浓缩胶 ddH2O 30%储备胶 1mol/...
@令饺5784：碱裂解法为什么溶液2要现用现配 -
生残19174547893…… 溶液2中的主要成分是NaOH和SDS,是用来裂解细胞的.因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙,影响使用效果,因此要现配现用. SDS的话,低温容易产生沉淀.不过在37°C 水浴一下就好.主要还是NaOH的问题.
@令饺5784：dna提取试验中用KAc的作用 -
生残19174547893…… 碱裂解法提取质粒DNA的时候,溶液三中用的是KAc,一方面利用HAc/Ac-缓冲体系平衡溶液二中NaOH的强碱性,使DNA复性;另一方面,K+与溶液二中的SDS(结合到蛋白质上)结合生成微溶性物质,促使体系中的蛋白质以及蛋白质所连接的基因组DNA的沉降. 另外,如楼上所说,pH4.8的NaAc溶液常用于配合异丙醇沉淀DNA.
@令饺5784：SDS电泳胶上的条带分子量怎么计算
生残19174547893…… 用迁移率算 迁移率=蛋白质分子的移动距离:前沿分子的移动距离 迁移率(m),蛋白质分子量(M) lg(M)=-bm+k 其中b和k为常数 也就是说迁移率(m)与蛋白质分子量(M)的对数成反比 实验中用已知蛋白质分子量(M)的Marker做参照,用尺子测量算出迁移率,作图,即可算出蛋白质的分子量
生残19174547893…… 1 DNA纯度 在DNA样品中若含有蛋白质,或没有去除干净制备过程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高浓度金属离子,均会降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用. 2 核酸内切限制酶的缓冲液 核酸内切限制酶的标准缓冲...
@令饺5784：提取大肠杆菌DNA时,裂解大肠杆菌最常采用的方法是什么?原理时什么? -
生残19174547893…… 最常用的办法是SDS法,在反应体系中加入终浓度约为1%的SDS37度水浴1小时就可以完成大肠杆菌的裂解.现在手提细菌的基因组DNA基本上就是这个办法,具体步骤在分子克隆和精编分子生物学实验指南上都有,是最经典的方法.SDS是一种阴离子去垢剂,能够破坏细菌的细胞壁和细胞膜.
@令饺5784：钻头中SDS+是什么意思 -
生残19174547893…… 碰巧知道这个.SDS表示免工具拆卸(Special_Direct_System),据说是BOSCH发明的,后面跟的英寸单位通常代表直径,有4坑道和5坑道设计,用X4或X5表示.也有用plus或max表示,SDS+(即SDS plus)表示四坑圆柄钻头, SDS Max 表示 五坑圆柄钻头,你想啊,原来的钻头都是用3条坑道固定,加一条就叫plus,5坑道就挺密了,快挤不下了,所以就用max表示了喔. 希望对你有帮助.
@令饺5784：western blot 转移缓冲液的配方? -
生残19174547893…… 转移缓冲液中不能含有sds的,sds会严重影响转印效果.
@令饺5784：急!在提革兰氏阳性菌基因组时加入蛋白酶K、溶菌酶和SDS的顺序是什么? -
生残19174547893…… 首先溶菌酶溶解细胞壁,使细胞破裂,因为细菌细胞无壁后易破裂,而且无核膜,所以不用加SDS破膜了. 然后蛋白酶K使多种蛋白质水解.蛋白酶K可在SDS存在下有活性. 再后SDS能使DNA和蛋白质分开. 蛋白酶K和溶菌酶不能一起加. SDS和酶K可以同时加. 也有某些文献是先加SDS再加酶K的,不过我还是建议按大多数的来,先酶K.更多的人都是同时加的.
@令饺5784：凝胶酶谱的SDS聚丙烯酰胺凝胶和western中的配制方法有什么区别? -
生残19174547893…… 凝胶酶谱的SDS-PAGE含0.1%明胶 配方: 分离胶 ddH2O 4.5ml 30%储备胶(0.8%甲叉+29.2%丙烯酰胺) 1.5mol/l Tris(PH 8.8) 10% SDS 10%过硫酸铵 TEMED 1%明胶(1g明胶-->100ml,37°C水浴溶解)0.5ml 浓缩胶 ddH2O 30%储备胶 1mol/...
@令饺5784：碱裂解法为什么溶液2要现用现配 -
生残19174547893…… 溶液2中的主要成分是NaOH和SDS,是用来裂解细胞的.因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙,影响使用效果,因此要现配现用. SDS的话,低温容易产生沉淀.不过在37°C 水浴一下就好.主要还是NaOH的问题.
@令饺5784：dna提取试验中用KAc的作用 -
生残19174547893…… 碱裂解法提取质粒DNA的时候,溶液三中用的是KAc,一方面利用HAc/Ac-缓冲体系平衡溶液二中NaOH的强碱性,使DNA复性;另一方面,K+与溶液二中的SDS(结合到蛋白质上)结合生成微溶性物质,促使体系中的蛋白质以及蛋白质所连接的基因组DNA的沉降. 另外,如楼上所说,pH4.8的NaAc溶液常用于配合异丙醇沉淀DNA.
@令饺5784：SDS电泳胶上的条带分子量怎么计算
生残19174547893…… 用迁移率算 迁移率=蛋白质分子的移动距离:前沿分子的移动距离 迁移率(m),蛋白质分子量(M) lg(M)=-bm+k 其中b和k为常数 也就是说迁移率(m)与蛋白质分子量(M)的对数成反比 实验中用已知蛋白质分子量(M)的Marker做参照,用尺子测量算出迁移率,作图,即可算出蛋白质的分子量
