5x蛋白loading+buffer配方
@巴元3819：SDS - PAGE 5Xloading buffer 配制过程,注意,问的不是配方,高手进 -
伏放19728137796…… 我想说以下几点: 1.SDS-PAGE loading buffer一般配成2X 的,5X loading buffer确实过于粘稠,且SDS在低温下难溶于水,这就导致你配的buffer“摇都摇不动”了 2.不知你为何要配那么多loading buffer(况且是5X的),这些东西都是用量很...
@巴元3819：5*loading buffer和6*loading buffer 都可以用检测dna吗? -
伏放19728137796…… Loading buffer就是帮你把DNA沉到加样孔里,同时提供电泳时的色素指示,所以5X还是6X没什么关系,即使是用于蛋白的Loading buffer也满足这个需求.
@巴元3819：WESTERN BLOT煮蛋白用得是几乘的loading buffer ,样品100ul, 5 乘的加多少? -
伏放19728137796…… 一般用1乘的终浓度,那么: 1如果你最终样品溶液希望是100ul,那就是:样品+20(ul)5乘原液+80(ul)ddH2O 2如果你的样品已经有100ul,那就看你拿多大的管子来煮了.如果用2ml管子煮,最好配1ml终液,那就是:样品液(100ul)+200(ul)5乘原液+700(ul)ddH2O 总之,记住5乘原液的话是1:4的关系,即1份5乘原液+4份其他.
@巴元3819：loading buffer 怎么调蛋白浓 -
伏放19728137796…… 要用loading buffer来调整蛋白浓度,可以通过配制出不同浓度的loading buffer来实现 最终加入到蛋白样品的loading buffer应该是1个单位的 可以通过配制出2~10个单位不等的loading buffer来调整蛋白浓度 比如2个单位的loading buffer加入蛋白样品,可以将蛋白浓度稀释一倍 而4个单位的loading buffer加入蛋白样品,就只能稀释25% 所以可以通过配制出不同浓度的loading buffer来调整蛋白浓度
@巴元3819：western blot 蛋白可以在加loading buffer之前煮吗 -
伏放19728137796…… 如果是已经制好的样~加入loading之后煮样~SDS能让蛋白彻底变性为线性并溶于样品中~加loading前煮样会造成protein变性聚集沉淀~
@巴元3819：加loading buffer煮沸后有沉淀影响蛋白浓度么 -
伏放19728137796…… 这个是看你的目的了,如果你要跑还原性电泳,那么样品需要用含有β-巯基乙醇的loading buffer沸煮5分钟,这样使蛋白间的二硫键在还原剂β-巯基乙醇的作用下被打开,得到的是蛋白的一级结构.而非还原的电泳就是在loading buffer中不加入还原剂β-巯基乙醇,这样的电泳比较能够真实的反应蛋白当时的情况,比如二聚体或者多聚体之类的.
@巴元3819：在western blot中loading buffer的作用是什么? -
伏放19728137796…… 1、指示剂,方便观察电泳进行的程度;2、密度大,携带你的样本沉到孔的底部;3、保持蛋白线性及携带过量负电荷的状态. 除此之外,里面最重要的是还有巯基乙醇还原剂来让蛋白质充分变性,同时保护-SH基团.
@巴元3819：蛋白电泳时直接使用4*loading buffer煮蛋白,有没有什么问题? -
伏放19728137796…… 按照比例加入,必然不会出现问题.loading buffer的主要成分是SDS,甘油,溴酚蓝,TRIS,其中甘油的作用是使样品沉到点样孔中而不漂浮起来,SDS是结合蛋白质,使所有蛋白质所带电荷性质一样,但不同分子量的蛋白结合的SDS数量是不一样的.溴酚蓝是指示剂,可以用来观察大概的电泳过程,因为它在不同浓度的胶中泳动的速率不一样,从而也可以看做是一个蛋白样品,这样就可以直观的大概了解蛋白泳动到了哪个位置,但是只能看一个大概
@巴元3819：SDS - PAGE时样品中都加什么 -
伏放19728137796…… 将loading buffer与你的蛋白样品按比例混合,高温变性后,放冰上5分钟后,上样电泳. loading buffer中包含甘氨酸,Tris-Hcl,SDS,甘油,溴酚兰,β-巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT). 甘氨酸和Tris-Hcl用来提供正负离子;SDS是变性剂,同时屏蔽蛋白本来的电荷;β-巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)为还原剂,进一步打开蛋白间亚结构.
@巴元3819：4*蛋白上样buffer为什么结块了 -
伏放19728137796…… 蛋白Loading buffer一般都配成5*的吧... 结块一般是低温保存的时候SDS析出来造成的,只要水浴加热一会就好了.
伏放19728137796…… 我想说以下几点: 1.SDS-PAGE loading buffer一般配成2X 的,5X loading buffer确实过于粘稠,且SDS在低温下难溶于水,这就导致你配的buffer“摇都摇不动”了 2.不知你为何要配那么多loading buffer(况且是5X的),这些东西都是用量很...
@巴元3819：5*loading buffer和6*loading buffer 都可以用检测dna吗? -
伏放19728137796…… Loading buffer就是帮你把DNA沉到加样孔里,同时提供电泳时的色素指示,所以5X还是6X没什么关系,即使是用于蛋白的Loading buffer也满足这个需求.
@巴元3819：WESTERN BLOT煮蛋白用得是几乘的loading buffer ,样品100ul, 5 乘的加多少? -
伏放19728137796…… 一般用1乘的终浓度,那么: 1如果你最终样品溶液希望是100ul,那就是:样品+20(ul)5乘原液+80(ul)ddH2O 2如果你的样品已经有100ul,那就看你拿多大的管子来煮了.如果用2ml管子煮,最好配1ml终液,那就是:样品液(100ul)+200(ul)5乘原液+700(ul)ddH2O 总之,记住5乘原液的话是1:4的关系,即1份5乘原液+4份其他.
@巴元3819：loading buffer 怎么调蛋白浓 -
伏放19728137796…… 要用loading buffer来调整蛋白浓度,可以通过配制出不同浓度的loading buffer来实现 最终加入到蛋白样品的loading buffer应该是1个单位的 可以通过配制出2~10个单位不等的loading buffer来调整蛋白浓度 比如2个单位的loading buffer加入蛋白样品,可以将蛋白浓度稀释一倍 而4个单位的loading buffer加入蛋白样品,就只能稀释25% 所以可以通过配制出不同浓度的loading buffer来调整蛋白浓度
@巴元3819：western blot 蛋白可以在加loading buffer之前煮吗 -
伏放19728137796…… 如果是已经制好的样~加入loading之后煮样~SDS能让蛋白彻底变性为线性并溶于样品中~加loading前煮样会造成protein变性聚集沉淀~
@巴元3819：加loading buffer煮沸后有沉淀影响蛋白浓度么 -
伏放19728137796…… 这个是看你的目的了,如果你要跑还原性电泳,那么样品需要用含有β-巯基乙醇的loading buffer沸煮5分钟,这样使蛋白间的二硫键在还原剂β-巯基乙醇的作用下被打开,得到的是蛋白的一级结构.而非还原的电泳就是在loading buffer中不加入还原剂β-巯基乙醇,这样的电泳比较能够真实的反应蛋白当时的情况,比如二聚体或者多聚体之类的.
@巴元3819：在western blot中loading buffer的作用是什么? -
伏放19728137796…… 1、指示剂,方便观察电泳进行的程度;2、密度大,携带你的样本沉到孔的底部;3、保持蛋白线性及携带过量负电荷的状态. 除此之外,里面最重要的是还有巯基乙醇还原剂来让蛋白质充分变性,同时保护-SH基团.
@巴元3819：蛋白电泳时直接使用4*loading buffer煮蛋白,有没有什么问题? -
伏放19728137796…… 按照比例加入,必然不会出现问题.loading buffer的主要成分是SDS,甘油,溴酚蓝,TRIS,其中甘油的作用是使样品沉到点样孔中而不漂浮起来,SDS是结合蛋白质,使所有蛋白质所带电荷性质一样,但不同分子量的蛋白结合的SDS数量是不一样的.溴酚蓝是指示剂,可以用来观察大概的电泳过程,因为它在不同浓度的胶中泳动的速率不一样,从而也可以看做是一个蛋白样品,这样就可以直观的大概了解蛋白泳动到了哪个位置,但是只能看一个大概
@巴元3819：SDS - PAGE时样品中都加什么 -
伏放19728137796…… 将loading buffer与你的蛋白样品按比例混合,高温变性后,放冰上5分钟后,上样电泳. loading buffer中包含甘氨酸,Tris-Hcl,SDS,甘油,溴酚兰,β-巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT). 甘氨酸和Tris-Hcl用来提供正负离子;SDS是变性剂,同时屏蔽蛋白本来的电荷;β-巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)为还原剂,进一步打开蛋白间亚结构.
@巴元3819：4*蛋白上样buffer为什么结块了 -
伏放19728137796…… 蛋白Loading buffer一般都配成5*的吧... 结块一般是低温保存的时候SDS析出来造成的,只要水浴加热一会就好了.
