caspase3蛋白分子量wb
@梁信5302：caspase是什么 -
荀俗17774546608…… caspases是一组存在于细胞质中具有类似结构的蛋白酶.它们的活性位点均包含半胱氨酸残基,能够特异性切割靶蛋白天冬氨酸残基后的肽键.因此caspases意为“天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶”.caspases负责选择性地切割某些蛋白质,切割的结果是使靶蛋白活化或失活,而非完全降解.
@梁信5302：caspase是基因还是蛋白 -
荀俗17774546608…… caspase-3在细胞凋亡中起着不可替代的作用,caspase-3基因转染昆虫Sf9细胞后引起细胞凋亡,这个过程可以被Bcl-2阻断;在发生凋亡的细胞提取液中去除caspase-3后,这些提取液就失去了诱导细胞凋亡的能力
@梁信5302：请教caspase - 3的检测方法问题
荀俗17774546608…… 博凌科为生物科技-为你解答:种方法都有自己的优缺点,关键是根据实验目的选择适合的方法.检测mRNA水平的表达,RT-PCR是广泛应用的比较好的方法;检测蛋白水平的表达,可以选择免疫细胞化学,Westen-Blot等,前者可以在细胞内定位但定量效果不佳,后者操作比较复杂,如想在较高水平杂 志发表论文最好选择此方法.检测Caspase-3活性还可以选用流式细胞仪来做,且可同时测定Caspase-8等的活性(多通路).
@梁信5302：western blot 检测caspase - 3遇到问题,求解答 -
荀俗17774546608…… 定量的话肯定是选ELISA. Western blot只是一个半定量的实验方法.检测误差的话...楼主一是一定要选好合适的内参,比如可以测目标蛋白/总蛋白,则内参是总蛋白量,如果使用目标蛋白/总组织重量,则很不准确,因为抽提过程的效率不稳定,即每克组织能够提取出来的蛋白量不固定,而且每个组织含水/含不相干的组织量也不同.建议楼主参考相关文献来选择内参.二是最普通的查验误差的办法,每个试样多测几个孔.一般至少两个,三个更好.确定每个孔读数一致或非常相近,则知道结果比较可信.
@梁信5302：怎样用western跑出caspase - 3 -
荀俗17774546608…… 1、Caspase8分为pro-Caspase8和active/cleaved-Caspase8两种形式,前者是Caspase8前体,而后者在凋亡因素诱导pro-Caspase8大量聚集后产生的. 2、正常情况下pro-Caspase8位于胞浆内,当凋亡启动时,大量的pro-Caspase8降解产生active-Caspase8,发生胞浆-胞膜之间的转移.
@梁信5302：免疫组化能检测到“活化的caspase3”嘛?western blot检测活化的caspase3是不是更准确? -
荀俗17774546608…… 当然了,WB是定量的,免疫组化有一定的主观因素
@梁信5302：为什么DEVDase的活性可以反映caspase - 3的活性,我知道DEVDase具有caspase - 3样的作用,但是为什么? -
荀俗17774546608…… caspase-3的活性可被DEVD抑制,而DEVD可被DEVDase降解,如果DEVDase含量较多的话,说明DEVD就会比较少,进而caspase-3的活性就会比较大,故而DEVDase含量与caspase-3的活性呈正相关.
@梁信5302：caspase家族的激活过程. -
荀俗17774546608…… propaspase有一个mRNA编码,分三段,前端是N-端前肽,中间是大亚基,后端是小亚基.2113 1首先在caspase前体的N-端前肽和大亚基之间的特定位5261点被水解去除N-端前肽 2然后再在大小亚基之间切割释放大小亚基 3并进而形成两两组...
@梁信5302：爱滋病毒使T细胞死亡,是细胞凋亡还是细胞坏死 -
荀俗17774546608…… 科学的问题当然应该科学地求证. HIV诱导的细胞死亡主要通过以下三种方式:(1)感染所导致的直接细胞毒性,(2)被直接感染的细胞所发生的细胞程序性死亡(包括凋亡和非凋亡方式),(3)未被直接感染的细胞(既所谓的旁观者细胞...
@梁信5302：基质胶三维培养的细胞检测细胞活性怎么测 -
荀俗17774546608…… 目前有专用的试剂:荧光染料和caspase-3的底物结合,加入细胞培养液,细胞可以自由摄入.进入细胞后,底物被活化的caspase3或者7降解后,释放的荧光染料进入细胞核,染色DNA.流式细胞仪检测,只要是和阴性对照相比荧光信号增高的,就是有caspase激活的.荧光强度越高,酶的活性越强.这个试剂 life technology出的 CellEvent? Caspase-3/7 Green Flow Cytometry Assay Kit
荀俗17774546608…… caspases是一组存在于细胞质中具有类似结构的蛋白酶.它们的活性位点均包含半胱氨酸残基,能够特异性切割靶蛋白天冬氨酸残基后的肽键.因此caspases意为“天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶”.caspases负责选择性地切割某些蛋白质,切割的结果是使靶蛋白活化或失活,而非完全降解.
@梁信5302：caspase是基因还是蛋白 -
荀俗17774546608…… caspase-3在细胞凋亡中起着不可替代的作用,caspase-3基因转染昆虫Sf9细胞后引起细胞凋亡,这个过程可以被Bcl-2阻断;在发生凋亡的细胞提取液中去除caspase-3后,这些提取液就失去了诱导细胞凋亡的能力
@梁信5302：请教caspase - 3的检测方法问题
荀俗17774546608…… 博凌科为生物科技-为你解答:种方法都有自己的优缺点,关键是根据实验目的选择适合的方法.检测mRNA水平的表达,RT-PCR是广泛应用的比较好的方法;检测蛋白水平的表达,可以选择免疫细胞化学,Westen-Blot等,前者可以在细胞内定位但定量效果不佳,后者操作比较复杂,如想在较高水平杂 志发表论文最好选择此方法.检测Caspase-3活性还可以选用流式细胞仪来做,且可同时测定Caspase-8等的活性(多通路).
@梁信5302：western blot 检测caspase - 3遇到问题,求解答 -
荀俗17774546608…… 定量的话肯定是选ELISA. Western blot只是一个半定量的实验方法.检测误差的话...楼主一是一定要选好合适的内参,比如可以测目标蛋白/总蛋白,则内参是总蛋白量,如果使用目标蛋白/总组织重量,则很不准确,因为抽提过程的效率不稳定,即每克组织能够提取出来的蛋白量不固定,而且每个组织含水/含不相干的组织量也不同.建议楼主参考相关文献来选择内参.二是最普通的查验误差的办法,每个试样多测几个孔.一般至少两个,三个更好.确定每个孔读数一致或非常相近,则知道结果比较可信.
@梁信5302：怎样用western跑出caspase - 3 -
荀俗17774546608…… 1、Caspase8分为pro-Caspase8和active/cleaved-Caspase8两种形式,前者是Caspase8前体,而后者在凋亡因素诱导pro-Caspase8大量聚集后产生的. 2、正常情况下pro-Caspase8位于胞浆内,当凋亡启动时,大量的pro-Caspase8降解产生active-Caspase8,发生胞浆-胞膜之间的转移.
@梁信5302：免疫组化能检测到“活化的caspase3”嘛?western blot检测活化的caspase3是不是更准确? -
荀俗17774546608…… 当然了,WB是定量的,免疫组化有一定的主观因素
@梁信5302：为什么DEVDase的活性可以反映caspase - 3的活性,我知道DEVDase具有caspase - 3样的作用,但是为什么? -
荀俗17774546608…… caspase-3的活性可被DEVD抑制,而DEVD可被DEVDase降解,如果DEVDase含量较多的话,说明DEVD就会比较少,进而caspase-3的活性就会比较大,故而DEVDase含量与caspase-3的活性呈正相关.
@梁信5302：caspase家族的激活过程. -
荀俗17774546608…… propaspase有一个mRNA编码,分三段,前端是N-端前肽,中间是大亚基,后端是小亚基.2113 1首先在caspase前体的N-端前肽和大亚基之间的特定位5261点被水解去除N-端前肽 2然后再在大小亚基之间切割释放大小亚基 3并进而形成两两组...
@梁信5302：爱滋病毒使T细胞死亡,是细胞凋亡还是细胞坏死 -
荀俗17774546608…… 科学的问题当然应该科学地求证. HIV诱导的细胞死亡主要通过以下三种方式:(1)感染所导致的直接细胞毒性,(2)被直接感染的细胞所发生的细胞程序性死亡(包括凋亡和非凋亡方式),(3)未被直接感染的细胞(既所谓的旁观者细胞...
@梁信5302：基质胶三维培养的细胞检测细胞活性怎么测 -
荀俗17774546608…… 目前有专用的试剂:荧光染料和caspase-3的底物结合,加入细胞培养液,细胞可以自由摄入.进入细胞后,底物被活化的caspase3或者7降解后,释放的荧光染料进入细胞核,染色DNA.流式细胞仪检测,只要是和阴性对照相比荧光信号增高的,就是有caspase激活的.荧光强度越高,酶的活性越强.这个试剂 life technology出的 CellEvent? Caspase-3/7 Green Flow Cytometry Assay Kit
