caspase3+跑不出来
@山该5616：怎样用western跑出caspase - 3 -
尤呢19874632706…… 1、Caspase8分为pro-Caspase8和active/cleaved-Caspase8两种形式,前者是Caspase8前体,而后者在凋亡因素诱导pro-Caspase8大量聚集后产生的. 2、正常情况下pro-Caspase8位于胞浆内,当凋亡启动时,大量的pro-Caspase8降解产生active-Caspase8,发生胞浆-胞膜之间的转移.
@山该5616：western blot 检测caspase - 3遇到问题,求解答 -
尤呢19874632706…… 定量的话肯定是选ELISA. Western blot只是一个半定量的实验方法.检测误差的话...楼主一是一定要选好合适的内参,比如可以测目标蛋白/总蛋白,则内参是总蛋白量,如果使用目标蛋白/总组织重量,则很不准确,因为抽提过程的效率不稳定,即每克组织能够提取出来的蛋白量不固定,而且每个组织含水/含不相干的组织量也不同.建议楼主参考相关文献来选择内参.二是最普通的查验误差的办法,每个试样多测几个孔.一般至少两个,三个更好.确定每个孔读数一致或非常相近,则知道结果比较可信.
@山该5616：请教caspase - 3的检测方法问题
尤呢19874632706…… 博凌科为生物科技-为你解答:种方法都有自己的优缺点,关键是根据实验目的选择适合的方法.检测mRNA水平的表达,RT-PCR是广泛应用的比较好的方法;检测蛋白水平的表达,可以选择免疫细胞化学,Westen-Blot等,前者可以在细胞内定位但定量效果不佳,后者操作比较复杂,如想在较高水平杂 志发表论文最好选择此方法.检测Caspase-3活性还可以选用流式细胞仪来做,且可同时测定Caspase-8等的活性(多通路).
@山该5616：看我的PCR扩增产物跑的电泳,其中一个为什么没跑出来,怎么判断DNA模板是不是有问题 -
尤呢19874632706…… 电泳图为什么没贴上来? 没跑出来的因素很多.别的都有就这一个没有的话,首先考虑肯定是模板有没有问题.其次机器和试剂还有PCR管是不是够干净或者够稳定.最后考虑有没有加错. 要判断模板有没有问题,你就按照之前的试验方案,就拿这一个样品,做梯度试验,做三四个样就可以了吧,同时拿上次做出来了的做对照.如果这次能出来,就说明模板没问题,是别的原因.如果还没有,就考虑模板有问题了.
@山该5616：如何进行Caspase - 3活性的流式细胞术检测 -
尤呢19874632706…… 目前有专用的试剂: 荧光染料和caspase-3的底物结合,加入细胞培养液,细胞可以自由摄入.进入细胞后,底物被活化的caspase3或者7降解后,释放的荧光染料进入细胞核,染色DNA. 流式细胞仪检测,只要是和阴性对照相比荧光信号增高的,就是有caspase激活的.荧光强度越高,酶的活性越强. 这个试剂 life technology出的 CellEvent® Caspase-3/7 Green Flow Cytometry Assay Kit
@山该5616：为什么DEVDase的活性可以反映caspase - 3的活性,我知道DEVDase具有caspase - 3样的作用,但是为什么? -
尤呢19874632706…… caspase-3的活性可被DEVD抑制,而DEVD可被DEVDase降解,如果DEVDase含量较多的话,说明DEVD就会比较少,进而caspase-3的活性就会比较大,故而DEVDase含量与caspase-3的活性呈正相关.
@山该5616：免疫组化能检测到“活化的caspase3”嘛?western blot检测活化的caspase3是不是更准确? -
尤呢19874632706…… 当然了,WB是定量的,免疫组化有一定的主观因素
@山该5616：免疫组化石蜡切片测caspase - 3需要修复抗原吗 -
尤呢19874632706…… 没做过caspase3,觉得也需要抗修.
@山该5616：cleaved caspase - 3,第一个词怎样翻译好 -
尤呢19874632706…… 割开 半胱天冬酶 半胱天冬酶(Caspase)分子是一类在进化上非常保守的蛋白酶类分子.该酶有多种亚型结构,其中最常见的是Caspase-2,Caspase-3型.对它们的检测也可以用于对肿瘤细胞的检测区分.
@山该5616：控制细胞凋亡的基因什么时候开始表达? -
尤呢19874632706…… 细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段: 接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化(Caspase)→进入连续反应过程 启动阶段 细胞凋亡的启动是细胞在感受到相应的信号刺激后胞内一系列控制开关的开启或关闭,不同...
尤呢19874632706…… 1、Caspase8分为pro-Caspase8和active/cleaved-Caspase8两种形式,前者是Caspase8前体,而后者在凋亡因素诱导pro-Caspase8大量聚集后产生的. 2、正常情况下pro-Caspase8位于胞浆内,当凋亡启动时,大量的pro-Caspase8降解产生active-Caspase8,发生胞浆-胞膜之间的转移.
@山该5616：western blot 检测caspase - 3遇到问题,求解答 -
尤呢19874632706…… 定量的话肯定是选ELISA. Western blot只是一个半定量的实验方法.检测误差的话...楼主一是一定要选好合适的内参,比如可以测目标蛋白/总蛋白,则内参是总蛋白量,如果使用目标蛋白/总组织重量,则很不准确,因为抽提过程的效率不稳定,即每克组织能够提取出来的蛋白量不固定,而且每个组织含水/含不相干的组织量也不同.建议楼主参考相关文献来选择内参.二是最普通的查验误差的办法,每个试样多测几个孔.一般至少两个,三个更好.确定每个孔读数一致或非常相近,则知道结果比较可信.
@山该5616：请教caspase - 3的检测方法问题
尤呢19874632706…… 博凌科为生物科技-为你解答:种方法都有自己的优缺点,关键是根据实验目的选择适合的方法.检测mRNA水平的表达,RT-PCR是广泛应用的比较好的方法;检测蛋白水平的表达,可以选择免疫细胞化学,Westen-Blot等,前者可以在细胞内定位但定量效果不佳,后者操作比较复杂,如想在较高水平杂 志发表论文最好选择此方法.检测Caspase-3活性还可以选用流式细胞仪来做,且可同时测定Caspase-8等的活性(多通路).
@山该5616：看我的PCR扩增产物跑的电泳,其中一个为什么没跑出来,怎么判断DNA模板是不是有问题 -
尤呢19874632706…… 电泳图为什么没贴上来? 没跑出来的因素很多.别的都有就这一个没有的话,首先考虑肯定是模板有没有问题.其次机器和试剂还有PCR管是不是够干净或者够稳定.最后考虑有没有加错. 要判断模板有没有问题,你就按照之前的试验方案,就拿这一个样品,做梯度试验,做三四个样就可以了吧,同时拿上次做出来了的做对照.如果这次能出来,就说明模板没问题,是别的原因.如果还没有,就考虑模板有问题了.
@山该5616：如何进行Caspase - 3活性的流式细胞术检测 -
尤呢19874632706…… 目前有专用的试剂: 荧光染料和caspase-3的底物结合,加入细胞培养液,细胞可以自由摄入.进入细胞后,底物被活化的caspase3或者7降解后,释放的荧光染料进入细胞核,染色DNA. 流式细胞仪检测,只要是和阴性对照相比荧光信号增高的,就是有caspase激活的.荧光强度越高,酶的活性越强. 这个试剂 life technology出的 CellEvent® Caspase-3/7 Green Flow Cytometry Assay Kit
@山该5616：为什么DEVDase的活性可以反映caspase - 3的活性,我知道DEVDase具有caspase - 3样的作用,但是为什么? -
尤呢19874632706…… caspase-3的活性可被DEVD抑制,而DEVD可被DEVDase降解,如果DEVDase含量较多的话,说明DEVD就会比较少,进而caspase-3的活性就会比较大,故而DEVDase含量与caspase-3的活性呈正相关.
@山该5616：免疫组化能检测到“活化的caspase3”嘛?western blot检测活化的caspase3是不是更准确? -
尤呢19874632706…… 当然了,WB是定量的,免疫组化有一定的主观因素
@山该5616：免疫组化石蜡切片测caspase - 3需要修复抗原吗 -
尤呢19874632706…… 没做过caspase3,觉得也需要抗修.
@山该5616：cleaved caspase - 3,第一个词怎样翻译好 -
尤呢19874632706…… 割开 半胱天冬酶 半胱天冬酶(Caspase)分子是一类在进化上非常保守的蛋白酶类分子.该酶有多种亚型结构,其中最常见的是Caspase-2,Caspase-3型.对它们的检测也可以用于对肿瘤细胞的检测区分.
@山该5616：控制细胞凋亡的基因什么时候开始表达? -
尤呢19874632706…… 细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段: 接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化(Caspase)→进入连续反应过程 启动阶段 细胞凋亡的启动是细胞在感受到相应的信号刺激后胞内一系列控制开关的开启或关闭,不同...
