iptg诱导能过夜吗
@王面3929：iptg诱导之前为什么要过夜揺菌并转接 - 作业帮
呼昨18834229279…… [答案] 做大肠杆菌培养表达一般是之前的分子克隆工作都做完了,这时候从平板上挑出的单克隆的菌体会先接到一个比较小体积的培养基中,一般就是100ml左右.因为较多使用的LB培养基营养成分比较少,所以需要过夜摇瓶让菌体生长到...
@王面3929：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
呼昨18834229279…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@王面3929：IPTG配制好未过滤除菌过夜了还能用吗 -
呼昨18834229279…… 不用
@王面3929：细菌flag蛋白纯化用什么菌株和载体 -
呼昨18834229279…… 3,重复(3)的步骤进行SDS-PAGE分析;ml 卡那霉素存储液,若转化DH5α.当需要表达蛋白时.750μl20mMTris-HCl,Western 印迹;ml乙酰BSA(根据需要补足水到30μl2)37℃温浴2-4h3)取3μl样品进行电泳检测消化反应进行的程度4)消...
@王面3929：PGEX系列表达载体的特点 -
呼昨18834229279…… pgex特点就是带有GST标签,可以增加目的蛋白的溶解度,别的没什么特点,属于大众型载体,目前也较常使用.你说的没有表达有没有做全菌的sds-page啊,不管是不是形成包涵体全菌电泳都应该有条带,至于形不形成包涵体就取决于你的...
@王面3929：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
呼昨18834229279…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@王面3929：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
呼昨18834229279…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@王面3929：低温过夜诱导蛋白,转速太高会怎么样 -
呼昨18834229279…… 诱导蛋白正常的诱导剂是IPTG,其他如阿拉伯糖,热诱导也可以诱导蛋白.诱导后的菌体只要冻存在负20度过夜处理也没关系.4度的话菌体差不多只能保存1周不到
@王面3929：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
呼昨18834229279…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@王面3929：请问IPTG能否在4℃诱导融合蛋白表达??? -
呼昨18834229279…… 条带亮不亮应该是根据你诱导的蛋白好不好表达而定的.你放冰箱后,IPTG在摇菌的时候就诱导表达.
呼昨18834229279…… [答案] 做大肠杆菌培养表达一般是之前的分子克隆工作都做完了,这时候从平板上挑出的单克隆的菌体会先接到一个比较小体积的培养基中,一般就是100ml左右.因为较多使用的LB培养基营养成分比较少,所以需要过夜摇瓶让菌体生长到...
@王面3929：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
呼昨18834229279…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@王面3929：IPTG配制好未过滤除菌过夜了还能用吗 -
呼昨18834229279…… 不用
@王面3929：细菌flag蛋白纯化用什么菌株和载体 -
呼昨18834229279…… 3,重复(3)的步骤进行SDS-PAGE分析;ml 卡那霉素存储液,若转化DH5α.当需要表达蛋白时.750μl20mMTris-HCl,Western 印迹;ml乙酰BSA(根据需要补足水到30μl2)37℃温浴2-4h3)取3μl样品进行电泳检测消化反应进行的程度4)消...
@王面3929：PGEX系列表达载体的特点 -
呼昨18834229279…… pgex特点就是带有GST标签,可以增加目的蛋白的溶解度,别的没什么特点,属于大众型载体,目前也较常使用.你说的没有表达有没有做全菌的sds-page啊,不管是不是形成包涵体全菌电泳都应该有条带,至于形不形成包涵体就取决于你的...
@王面3929：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
呼昨18834229279…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@王面3929：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
呼昨18834229279…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@王面3929：低温过夜诱导蛋白,转速太高会怎么样 -
呼昨18834229279…… 诱导蛋白正常的诱导剂是IPTG,其他如阿拉伯糖,热诱导也可以诱导蛋白.诱导后的菌体只要冻存在负20度过夜处理也没关系.4度的话菌体差不多只能保存1周不到
@王面3929：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
呼昨18834229279…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@王面3929：请问IPTG能否在4℃诱导融合蛋白表达??? -
呼昨18834229279…… 条带亮不亮应该是根据你诱导的蛋白好不好表达而定的.你放冰箱后,IPTG在摇菌的时候就诱导表达.
