klenow大片段酶
@唐梅1622：什么是Klenow酶?它的活性有哪些?在基因工程中有什么作用 -
林支18966678846…… Klenow Fragment,又称Klenow片段,是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片断(Large Fragment).Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性,但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性....
@唐梅1622：klenow片段和大肠杆菌dna聚合酶i有何异同 -
林支18966678846…… 相同点:①都具有Klenow片段序列②都具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性. 不同点: ①DNA聚合酶I还具有5'→3'外切酶活性. ②主要用途不同. A.DNA聚合酶I的用途 I.制备高比活度DNA探针 II.用于DNA连接后的大缺口填充 III.用于DNA的序列分析 B.Klenow酶 I.补平由核酸内切酶产生的5'粘性末端 II.DNA片段的同位素末端标记 III.cDNA第二链的形成 IV.双脱氧末端终止法(Sanger)法测定DNA序列 ③仅有DNA聚合酶I能够催化切口平移反应 ④Klenow酶不能直接用于3'突出末端的DNA的标记
@唐梅1622：klenow酶与大肠杆菌DNA聚合酶I在结构上和功能上的主要区别是什么? -
林支18966678846…… Klenow酶是 Hans Klenow 1970年用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ时,得到的两个片段中分子量较大的一个,它含有605个氨基酸残基(324~928),并有大小两个结构域,其中大结构域(518~928)具有5'→3'聚合酶活性,小结构域(324~517)则具有3'→5'外切酶活性.缺少一个5'-3'的外切酶活性,5'-3'的外切酶活性在蛋白质的N端,枯草杆菌蛋白酶切掉N端使其丧失该活性. 功能上的区别:DNA聚合酶I可通过DNA缺口平移的方法制备DNA探针.而klenow酶主要用于缺口平移标记DNA,也用于DNA的缺口补平和延伸.还在cDNA克隆中用于第二条cDNA链的合成.
@唐梅1622：cDNA合成时要用到Klenow片段吗? -
林支18966678846…… Klenow片段是DNA-pol I(DNA聚合酶I)的大片段,具有完整的DNA-pol I的5'到3'聚合活性、3'到5'的外切活性,无5'到3'的外切活性,一般是cDNA第二链的合成.cDNA合成主要靠DNA-pol I和反转录酶
@唐梅1622：Klenow片段有什么特点呢?
林支18966678846…… Klenow片段不能耐受95℃的双链DNA变性温度,所以每次循环都要加入新酶;而TaqDNA聚合酶可以耐受93~95℃的高温,避免了不断补加多聚酶的繁琐操作,同时使退火和延伸温度得以提高,减少了非特异性产物和DNA二级结构对PCR的干扰,增进了PCR特异性、产量和敏感度,二者相比,其主要区别在于:①Klenow酶的最适温度为37℃,扩增的产物并非全是目的序列,需用探针检测
@唐梅1622：基因工程常用的dna连接酶 -
林支18966678846…… ①构建基因表达载体时DNA连接酶,DNA连接酶是基因工程的工具酶之一,①正确; ②蛋白酶是水解蛋白质的酶,基因工程中不需要蛋白酶,②错误; ③基因工程中,获取目的基因和构建基因表达载体时需要限制性内切酶,③正确; ④解旋酶用于DNA分子的解旋,不属于基因工程工具酶,④错误. 故选:A.
@唐梅1622：在生物界DNA合成的方式有几种?大肠杆菌及其真核生物中有哪些DNA聚合酶及它们各有何功能? -
林支18966678846…… 两种 第一种是DNA自我复制 即:以一条DNA为母链按碱基互补配对原则合成子代DNA的过程 第二种是以RNA为模板的逆转录 1、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(DNApolymeraseⅠ,DNApolⅠ)这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶,又...
林支18966678846…… Klenow Fragment,又称Klenow片段,是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片断(Large Fragment).Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性,但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性....
@唐梅1622：klenow片段和大肠杆菌dna聚合酶i有何异同 -
林支18966678846…… 相同点:①都具有Klenow片段序列②都具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性. 不同点: ①DNA聚合酶I还具有5'→3'外切酶活性. ②主要用途不同. A.DNA聚合酶I的用途 I.制备高比活度DNA探针 II.用于DNA连接后的大缺口填充 III.用于DNA的序列分析 B.Klenow酶 I.补平由核酸内切酶产生的5'粘性末端 II.DNA片段的同位素末端标记 III.cDNA第二链的形成 IV.双脱氧末端终止法(Sanger)法测定DNA序列 ③仅有DNA聚合酶I能够催化切口平移反应 ④Klenow酶不能直接用于3'突出末端的DNA的标记
@唐梅1622：klenow酶与大肠杆菌DNA聚合酶I在结构上和功能上的主要区别是什么? -
林支18966678846…… Klenow酶是 Hans Klenow 1970年用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ时,得到的两个片段中分子量较大的一个,它含有605个氨基酸残基(324~928),并有大小两个结构域,其中大结构域(518~928)具有5'→3'聚合酶活性,小结构域(324~517)则具有3'→5'外切酶活性.缺少一个5'-3'的外切酶活性,5'-3'的外切酶活性在蛋白质的N端,枯草杆菌蛋白酶切掉N端使其丧失该活性. 功能上的区别:DNA聚合酶I可通过DNA缺口平移的方法制备DNA探针.而klenow酶主要用于缺口平移标记DNA,也用于DNA的缺口补平和延伸.还在cDNA克隆中用于第二条cDNA链的合成.
@唐梅1622：cDNA合成时要用到Klenow片段吗? -
林支18966678846…… Klenow片段是DNA-pol I(DNA聚合酶I)的大片段,具有完整的DNA-pol I的5'到3'聚合活性、3'到5'的外切活性,无5'到3'的外切活性,一般是cDNA第二链的合成.cDNA合成主要靠DNA-pol I和反转录酶
@唐梅1622：Klenow片段有什么特点呢?
林支18966678846…… Klenow片段不能耐受95℃的双链DNA变性温度,所以每次循环都要加入新酶;而TaqDNA聚合酶可以耐受93~95℃的高温,避免了不断补加多聚酶的繁琐操作,同时使退火和延伸温度得以提高,减少了非特异性产物和DNA二级结构对PCR的干扰,增进了PCR特异性、产量和敏感度,二者相比,其主要区别在于:①Klenow酶的最适温度为37℃,扩增的产物并非全是目的序列,需用探针检测
@唐梅1622：基因工程常用的dna连接酶 -
林支18966678846…… ①构建基因表达载体时DNA连接酶,DNA连接酶是基因工程的工具酶之一,①正确; ②蛋白酶是水解蛋白质的酶,基因工程中不需要蛋白酶,②错误; ③基因工程中,获取目的基因和构建基因表达载体时需要限制性内切酶,③正确; ④解旋酶用于DNA分子的解旋,不属于基因工程工具酶,④错误. 故选:A.
@唐梅1622：在生物界DNA合成的方式有几种?大肠杆菌及其真核生物中有哪些DNA聚合酶及它们各有何功能? -
林支18966678846…… 两种 第一种是DNA自我复制 即:以一条DNA为母链按碱基互补配对原则合成子代DNA的过程 第二种是以RNA为模板的逆转录 1、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(DNApolymeraseⅠ,DNApolⅠ)这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶,又...
