klenow+fragment
@水矿6753：什么是Klenow酶?它的活性有哪些?在基因工程中有什么作用 -
迟矿18891979984…… Klenow Fragment,又称Klenow片段,是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片断(Large Fragment).Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性,但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性....
@水矿6753：klenow fragment如何使用?举例说明 -
迟矿18891979984…… 大肠杆菌DNA聚合酶的其中一个大片段 有5'->3'的聚合酶活性和3'->5'的外切酶活性37摄氏度反应 通常用作粘性末端补平,PCR末端A补平,末端标记,cDNA第二链合成等等 不耐高温,不适用于PCR 反应体系自然是看说明书了,通常这种东西买回来都是一个kit 里面会有浓缩缓冲液,dNTP之类的东西 你按照说明书的protocol做就是了
@水矿6753：klenow酶与大肠杆菌DNA聚合酶I在结构上和功能上的主要区别是什么? -
迟矿18891979984…… Klenow酶是 Hans Klenow 1970年用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ时,得到的两个片段中分子量较大的一个,它含有605个氨基酸残基(324~928),并有大小两个结构域,其中大结构域(518~928)具有5'→3'聚合酶活性,小结构域(324~517)则具有3'→5'外切酶活性.缺少一个5'-3'的外切酶活性,5'-3'的外切酶活性在蛋白质的N端,枯草杆菌蛋白酶切掉N端使其丧失该活性. 功能上的区别:DNA聚合酶I可通过DNA缺口平移的方法制备DNA探针.而klenow酶主要用于缺口平移标记DNA,也用于DNA的缺口补平和延伸.还在cDNA克隆中用于第二条cDNA链的合成.
@水矿6753：如果两个DNA片断是黏性末端,但不互补,怎么连? -
迟矿18891979984…… 可以用T4 polymerase或者Klenow fragment补平或者削平成为平末端,然后进行平末端连接.效率会低一点.
@水矿6753：真核生物复制起点的结构特征 -
迟矿18891979984…… 一般把生物体的复制单位称为复制子(replicon).一个复制子只含一个复制起点. 多复制子:DNA复制时,原核生物一般只有一个起始位点,而真核生物则有多个起始位点,因而在复制时呈现多复制泡,也称为多复制子.DNA的复制主...
@水矿6753：klenow片段和大肠杆菌dna聚合酶i有何异同 -
迟矿18891979984…… 相同点:①都具有Klenow片段序列②都具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性. 不同点: ①DNA聚合酶I还具有5'→3'外切酶活性. ②主要用途不同. A.DNA聚合酶I的用途 I.制备高比活度DNA探针 II.用于DNA连接后的大缺口填充 III.用于DNA的序列分析 B.Klenow酶 I.补平由核酸内切酶产生的5'粘性末端 II.DNA片段的同位素末端标记 III.cDNA第二链的形成 IV.双脱氧末端终止法(Sanger)法测定DNA序列 ③仅有DNA聚合酶I能够催化切口平移反应 ④Klenow酶不能直接用于3'突出末端的DNA的标记
@水矿6753：什么是pto塑料 -
迟矿18891979984…… 3'-末端硫代磷酸酯(PTO)修饰 是DNA序列对校正DNA聚合酶 的3'=>5'外切核酸酶有抗性,如Klenow Fragment和phi29 DNA 聚合酶.
@水矿6753：基因的不同黏性末端要怎样连接? -
迟矿18891979984…… 不同的黏性末端原则上无法直接连接,但可将它们转化为平头末端后再进行连接,所产生的重组分子往往会增加或减少几个碱基对,并且破坏了原来的酶切位点,使重组的外源DNA片段无法回收;若连接位点位于基因编码区内,则会破坏阅读框...
@水矿6753：cDNA合成时要用到Klenow片段吗? -
迟矿18891979984…… Klenow片段是DNA-pol I(DNA聚合酶I)的大片段,具有完整的DNA-pol I的5'到3'聚合活性、3'到5'的外切活性,无5'到3'的外切活性,一般是cDNA第二链的合成.cDNA合成主要靠DNA-pol I和反转录酶
@水矿6753：分析下列有关基因工程材料,据图回答:降钙素是一种多肽类激素,临床上用于治疗骨质疏松症等.人的降钙素 -
迟矿18891979984…… (1)由图可知,“利用Klenow酶补平,获得双链DNA”可知,该酶是DNA聚合酶,人工合成DNA单链有72个碱基,且有18个碱基重合,所以碱基对数目为72*2-18=126. (2)目的基因的获取可利用限制酶从供体细胞DNA中直接分离基因. (3)目的...
迟矿18891979984…… Klenow Fragment,又称Klenow片段,是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片断(Large Fragment).Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性,但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性....
@水矿6753：klenow fragment如何使用?举例说明 -
迟矿18891979984…… 大肠杆菌DNA聚合酶的其中一个大片段 有5'->3'的聚合酶活性和3'->5'的外切酶活性37摄氏度反应 通常用作粘性末端补平,PCR末端A补平,末端标记,cDNA第二链合成等等 不耐高温,不适用于PCR 反应体系自然是看说明书了,通常这种东西买回来都是一个kit 里面会有浓缩缓冲液,dNTP之类的东西 你按照说明书的protocol做就是了
@水矿6753：klenow酶与大肠杆菌DNA聚合酶I在结构上和功能上的主要区别是什么? -
迟矿18891979984…… Klenow酶是 Hans Klenow 1970年用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ时,得到的两个片段中分子量较大的一个,它含有605个氨基酸残基(324~928),并有大小两个结构域,其中大结构域(518~928)具有5'→3'聚合酶活性,小结构域(324~517)则具有3'→5'外切酶活性.缺少一个5'-3'的外切酶活性,5'-3'的外切酶活性在蛋白质的N端,枯草杆菌蛋白酶切掉N端使其丧失该活性. 功能上的区别:DNA聚合酶I可通过DNA缺口平移的方法制备DNA探针.而klenow酶主要用于缺口平移标记DNA,也用于DNA的缺口补平和延伸.还在cDNA克隆中用于第二条cDNA链的合成.
@水矿6753：如果两个DNA片断是黏性末端,但不互补,怎么连? -
迟矿18891979984…… 可以用T4 polymerase或者Klenow fragment补平或者削平成为平末端,然后进行平末端连接.效率会低一点.
@水矿6753：真核生物复制起点的结构特征 -
迟矿18891979984…… 一般把生物体的复制单位称为复制子(replicon).一个复制子只含一个复制起点. 多复制子:DNA复制时,原核生物一般只有一个起始位点,而真核生物则有多个起始位点,因而在复制时呈现多复制泡,也称为多复制子.DNA的复制主...
@水矿6753：klenow片段和大肠杆菌dna聚合酶i有何异同 -
迟矿18891979984…… 相同点:①都具有Klenow片段序列②都具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性. 不同点: ①DNA聚合酶I还具有5'→3'外切酶活性. ②主要用途不同. A.DNA聚合酶I的用途 I.制备高比活度DNA探针 II.用于DNA连接后的大缺口填充 III.用于DNA的序列分析 B.Klenow酶 I.补平由核酸内切酶产生的5'粘性末端 II.DNA片段的同位素末端标记 III.cDNA第二链的形成 IV.双脱氧末端终止法(Sanger)法测定DNA序列 ③仅有DNA聚合酶I能够催化切口平移反应 ④Klenow酶不能直接用于3'突出末端的DNA的标记
@水矿6753：什么是pto塑料 -
迟矿18891979984…… 3'-末端硫代磷酸酯(PTO)修饰 是DNA序列对校正DNA聚合酶 的3'=>5'外切核酸酶有抗性,如Klenow Fragment和phi29 DNA 聚合酶.
@水矿6753：基因的不同黏性末端要怎样连接? -
迟矿18891979984…… 不同的黏性末端原则上无法直接连接,但可将它们转化为平头末端后再进行连接,所产生的重组分子往往会增加或减少几个碱基对,并且破坏了原来的酶切位点,使重组的外源DNA片段无法回收;若连接位点位于基因编码区内,则会破坏阅读框...
@水矿6753：cDNA合成时要用到Klenow片段吗? -
迟矿18891979984…… Klenow片段是DNA-pol I(DNA聚合酶I)的大片段,具有完整的DNA-pol I的5'到3'聚合活性、3'到5'的外切活性,无5'到3'的外切活性,一般是cDNA第二链的合成.cDNA合成主要靠DNA-pol I和反转录酶
@水矿6753：分析下列有关基因工程材料,据图回答:降钙素是一种多肽类激素,临床上用于治疗骨质疏松症等.人的降钙素 -
迟矿18891979984…… (1)由图可知,“利用Klenow酶补平,获得双链DNA”可知,该酶是DNA聚合酶,人工合成DNA单链有72个碱基,且有18个碱基重合,所以碱基对数目为72*2-18=126. (2)目的基因的获取可利用限制酶从供体细胞DNA中直接分离基因. (3)目的...
