takara+dna+marker
@扶薇3012：怎样根据DNAmark的亮度来推测自己提的DNA的浓度
沃左13022149577…… 我自己当时毛估的方法(举例TAKARA 250 bp DNA Ladder Marker): 这是公司说明书: ■ 浓度 约500 ng/ 5μl ■ 制品说明 本制品由双链DNA片段250 bp、500 bp、750 bp、1000 bp、1500 bp、2250 bp、3000 bp、4500 bp组成,共8条带.其中1000 bp的DNA片段为指示带,显示亮带.本品已混有上样缓冲液,可直接用于凝胶电泳.
@扶薇3012：做琼脂糖凝胶电泳中的dna条带分析,用的Trans DNA Marker(全式金的产品),我应该怎么操作? -
沃左13022149577…… 用什么DNA Marker不重要,电泳的时候安装说明书建议的用量(我们用的是TAKARA公司的Marker,一般小孔胶加5ul),直接加到样品边上的孔里就OK了.
@扶薇3012：什么是生物克隆中的Control反应 -
沃左13022149577…… 就是用Takara 的载体(pMD18-T Simple Vector),加上Takara提供的DNA片断(Control Insert),来做一个对照实验(Control反应),可用来检测一下这批载体是否有问题.
@扶薇3012：请教反转录cDNA的体系中,Random 6 mers是什么啊? -
沃左13022149577…… 这个体系是TaKaRa反转录试剂盒中的体系,稍有不同的是第二个PrimeSciptTMRT Enzyme Mix I,试剂盒中为0.5μL.Total RNA试剂盒中没有标明使用量,根据自己提取的RNA浓度来确定,但你这里的使用量应该有点大,试剂盒中有说明,10μL...
@扶薇3012：Takara胶回收试剂盒 说明书,具体操作步骤 -
沃左13022149577…… 1. 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段,任何类型或等级的琼脂糖都可以使用.我们强烈的建议您使用新鲜的TAE Buffer作为电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,因为会因其PH的升高而减少产量.新鲜的TBE也可以用,但只能得到较低的产量.2. 当所...
@扶薇3012：PCR时人模板DNA的量加到5μg会不会有点多? 用的是TaKaRa Taq,50ul的反应体系 -
沃左13022149577…… 5μg的确有点多,看来你的DNA原液的浓度很高,一般PCR需要的模板量是有一定范围的,也是根据你要做的分子实验所需的PCR情况而不同的,模板量太高也许会有拖带或变性不完全现象,50ul你可以试着DNA终模板量为1μg或做几个不同模板量的梯度PCR,看看哪种效果最好,得以优化DNA模板量!
@扶薇3012：takara测序发给我的结果,包含三个文件,除了两个双向测序的结果以外,还有一个特别短的是什么? -
沃左13022149577…… 最准确的方法,你可以将测序结果放到相关的软件Sequencher里面分析,比对就OK啦. 不过通过你的表述,我个人觉得PCR产物较长或者克隆片段较长的可能性比较大,一个反应测不通,就会采用双向测序的方法,即两头测.由于测序反应一次读取的长度有限,有可能两头测也没有测通,然后你说的测序公司会根据已经得到的测序结果再次设计引物,进行测序,最后测通.两头的测序结果就可能是P1和P2,那么剩余中间的测序结果为R1. 说的不一定对,最好还是和测序公司联系一下吧.
@扶薇3012：有人用takara的消除gDNA的反转录试剂盒吗 -
沃左13022149577…… 对于新手来说购买反转录试剂盒是比较理想的,买一个kit看看说明书操作就可以了.推荐两款kit TAKARA和HaiGene,这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除,因此对RNA质量的要求不高.TAKARA的RR047A操作方便,反转录温度...
@扶薇3012：Takara DNA聚合酶上标HS什么意思
沃左13022149577…… 具体看你说的哪种产品,不过应该是Hot start的意思.
@扶薇3012：Takara的NheI 和BamHI双酶切体系表中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓冲液呢? -
沃左13022149577…… 1、如果你用的是Takara的酶,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧. 2、为什么不用NEB的酶呢?可以用buffer1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,效率更高,都可以在buffer4中达到100%的效率.以上,仅供参考~希望有帮助!
沃左13022149577…… 我自己当时毛估的方法(举例TAKARA 250 bp DNA Ladder Marker): 这是公司说明书: ■ 浓度 约500 ng/ 5μl ■ 制品说明 本制品由双链DNA片段250 bp、500 bp、750 bp、1000 bp、1500 bp、2250 bp、3000 bp、4500 bp组成,共8条带.其中1000 bp的DNA片段为指示带,显示亮带.本品已混有上样缓冲液,可直接用于凝胶电泳.
@扶薇3012：做琼脂糖凝胶电泳中的dna条带分析,用的Trans DNA Marker(全式金的产品),我应该怎么操作? -
沃左13022149577…… 用什么DNA Marker不重要,电泳的时候安装说明书建议的用量(我们用的是TAKARA公司的Marker,一般小孔胶加5ul),直接加到样品边上的孔里就OK了.
@扶薇3012：什么是生物克隆中的Control反应 -
沃左13022149577…… 就是用Takara 的载体(pMD18-T Simple Vector),加上Takara提供的DNA片断(Control Insert),来做一个对照实验(Control反应),可用来检测一下这批载体是否有问题.
@扶薇3012：请教反转录cDNA的体系中,Random 6 mers是什么啊? -
沃左13022149577…… 这个体系是TaKaRa反转录试剂盒中的体系,稍有不同的是第二个PrimeSciptTMRT Enzyme Mix I,试剂盒中为0.5μL.Total RNA试剂盒中没有标明使用量,根据自己提取的RNA浓度来确定,但你这里的使用量应该有点大,试剂盒中有说明,10μL...
@扶薇3012：Takara胶回收试剂盒 说明书,具体操作步骤 -
沃左13022149577…… 1. 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段,任何类型或等级的琼脂糖都可以使用.我们强烈的建议您使用新鲜的TAE Buffer作为电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,因为会因其PH的升高而减少产量.新鲜的TBE也可以用,但只能得到较低的产量.2. 当所...
@扶薇3012：PCR时人模板DNA的量加到5μg会不会有点多? 用的是TaKaRa Taq,50ul的反应体系 -
沃左13022149577…… 5μg的确有点多,看来你的DNA原液的浓度很高,一般PCR需要的模板量是有一定范围的,也是根据你要做的分子实验所需的PCR情况而不同的,模板量太高也许会有拖带或变性不完全现象,50ul你可以试着DNA终模板量为1μg或做几个不同模板量的梯度PCR,看看哪种效果最好,得以优化DNA模板量!
@扶薇3012：takara测序发给我的结果,包含三个文件,除了两个双向测序的结果以外,还有一个特别短的是什么? -
沃左13022149577…… 最准确的方法,你可以将测序结果放到相关的软件Sequencher里面分析,比对就OK啦. 不过通过你的表述,我个人觉得PCR产物较长或者克隆片段较长的可能性比较大,一个反应测不通,就会采用双向测序的方法,即两头测.由于测序反应一次读取的长度有限,有可能两头测也没有测通,然后你说的测序公司会根据已经得到的测序结果再次设计引物,进行测序,最后测通.两头的测序结果就可能是P1和P2,那么剩余中间的测序结果为R1. 说的不一定对,最好还是和测序公司联系一下吧.
@扶薇3012：有人用takara的消除gDNA的反转录试剂盒吗 -
沃左13022149577…… 对于新手来说购买反转录试剂盒是比较理想的,买一个kit看看说明书操作就可以了.推荐两款kit TAKARA和HaiGene,这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除,因此对RNA质量的要求不高.TAKARA的RR047A操作方便,反转录温度...
@扶薇3012：Takara DNA聚合酶上标HS什么意思
沃左13022149577…… 具体看你说的哪种产品,不过应该是Hot start的意思.
@扶薇3012：Takara的NheI 和BamHI双酶切体系表中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓冲液呢? -
沃左13022149577…… 1、如果你用的是Takara的酶,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧. 2、为什么不用NEB的酶呢?可以用buffer1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,效率更高,都可以在buffer4中达到100%的效率.以上,仅供参考~希望有帮助!
