wb的内参什么时候加
@包皇5523：什么时候选择线粒体内参抗体?
戈音15882963613…… 我们知道,在Western Blotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参蛋白,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参在各组...
@包皇5523：Western Blot为什么必须要用内参 -
戈音15882963613…… Western Blot为什么必须要用内参 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为WesternBlot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然...
@包皇5523：关于WESTERN BLOT的内参 -
戈音15882963613…… 肯定要加二抗啊,内参和你的目的蛋白是一样的,也是一个蛋白,只不过表达比你的目的蛋白在各个组织之间恒定许多,它是你的目的蛋白的一个参照,但是它的作用和mark还不一样,所以内参是一定要要的,否则,人家会质疑你实验的可信性. 如果你的实验动物是大鼠,打个比方一抗是兔抗鼠吧或者其他的什么抗鼠的,二抗就是什么抗兔的,比如说羊抗兔之类,一抗最好买国外的,二抗国内的就可以了
@包皇5523：WB试验之如何选择内参抗体 -
戈音15882963613…… 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~
@包皇5523：western blot电泳时内参上样量怎么确定 -
戈音15882963613…… 内参一般情况下的定义是正常样品中本来就有的相对更为稳定存在分子.所以,你做好实验的“阳性对照”、“阴性对照”,然后保持与“试验处理样品”同样的样品上样量,再然后对pvdf膜进行剪切以及分别的抗体(内参抗体、目标蛋白的特异性抗体)孵育就可以很放心地做后续分析了.
@包皇5523：在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 -
戈音15882963613…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@包皇5523：做wb的bax和bcl - 2的目的蛋白时会出现时间长的细胞凋亡而导致内参出不来吗 -
戈音15882963613…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD. 1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西. 2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@包皇5523：western blot等生物学试验中的内参是什么意思 -
戈音15882963613…… 内参就是标准品,是对照.WB或者RNA实验想要简单的看一下相对定量结果,没有内参就没有测量标准,将内参固定一个浓度后样品的浓度就可以参照内参来相对定量一下.
@包皇5523：什么是内参抗体?购买内参抗体需要注意什么?
戈音15882963613…… 要用内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相...
@包皇5523：western blotting 中内参的作用是什么 -
戈音15882963613…… 嗯,同意楼上的说法,内参一般都是选用细胞内表达稳定,表达量比较高的蛋白,比如一些骨架蛋白.这些蛋白一般认为不会因为实验处理,细胞状态不同而在总蛋白中的含量有大的起伏. 有内参的话,你的目的蛋白的表达的比较才有意义,否则的话,你说某一组的目标蛋白表达升高了,怎么排除你上样上多了的原因.
戈音15882963613…… 我们知道,在Western Blotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参蛋白,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参在各组...
@包皇5523：Western Blot为什么必须要用内参 -
戈音15882963613…… Western Blot为什么必须要用内参 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为WesternBlot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然...
@包皇5523：关于WESTERN BLOT的内参 -
戈音15882963613…… 肯定要加二抗啊,内参和你的目的蛋白是一样的,也是一个蛋白,只不过表达比你的目的蛋白在各个组织之间恒定许多,它是你的目的蛋白的一个参照,但是它的作用和mark还不一样,所以内参是一定要要的,否则,人家会质疑你实验的可信性. 如果你的实验动物是大鼠,打个比方一抗是兔抗鼠吧或者其他的什么抗鼠的,二抗就是什么抗兔的,比如说羊抗兔之类,一抗最好买国外的,二抗国内的就可以了
@包皇5523：WB试验之如何选择内参抗体 -
戈音15882963613…… 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~
@包皇5523：western blot电泳时内参上样量怎么确定 -
戈音15882963613…… 内参一般情况下的定义是正常样品中本来就有的相对更为稳定存在分子.所以,你做好实验的“阳性对照”、“阴性对照”,然后保持与“试验处理样品”同样的样品上样量,再然后对pvdf膜进行剪切以及分别的抗体(内参抗体、目标蛋白的特异性抗体)孵育就可以很放心地做后续分析了.
@包皇5523：在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 -
戈音15882963613…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@包皇5523：做wb的bax和bcl - 2的目的蛋白时会出现时间长的细胞凋亡而导致内参出不来吗 -
戈音15882963613…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD. 1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西. 2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@包皇5523：western blot等生物学试验中的内参是什么意思 -
戈音15882963613…… 内参就是标准品,是对照.WB或者RNA实验想要简单的看一下相对定量结果,没有内参就没有测量标准,将内参固定一个浓度后样品的浓度就可以参照内参来相对定量一下.
@包皇5523：什么是内参抗体?购买内参抗体需要注意什么?
戈音15882963613…… 要用内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相...
@包皇5523：western blotting 中内参的作用是什么 -
戈音15882963613…… 嗯,同意楼上的说法,内参一般都是选用细胞内表达稳定,表达量比较高的蛋白,比如一些骨架蛋白.这些蛋白一般认为不会因为实验处理,细胞状态不同而在总蛋白中的含量有大的起伏. 有内参的话,你的目的蛋白的表达的比较才有意义,否则的话,你说某一组的目标蛋白表达升高了,怎么排除你上样上多了的原因.
