western+blot内参
@太丹6867：western blot等生物学试验中的内参是什么意思? - 作业帮
沙毅13588341380…… [答案] western blot用来检测蛋白表达的变化,而检测表达变化的前提就是,你每个孔跑得总蛋白量是相同的,如果上样量都不同,还怎么检测不同组间目的蛋白量的区别,这样内参就可以作为检测蛋白上样量是否相同的标准.内参一般选那...
@太丹6867：western blotting 中内参的作用是什么 -
沙毅13588341380…… 嗯,同意楼上的说法,内参一般都是选用细胞内表达稳定,表达量比较高的蛋白,比如一些骨架蛋白.这些蛋白一般认为不会因为实验处理,细胞状态不同而在总蛋白中的含量有大的起伏. 有内参的话,你的目的蛋白的表达的比较才有意义,否则的话,你说某一组的目标蛋白表达升高了,怎么排除你上样上多了的原因.
@太丹6867：Western Blot为什么必须要用内参 -
沙毅13588341380…… Western Blot为什么必须要用内参 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为WesternBlot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然...
@太丹6867：western blot 的一抗是内参抗体吗 -
沙毅13588341380…… 内参抗体是个什么鬼? 一抗就是你要检测的目的抗体. GAPDH作为内参的话,也是要孵它的一抗
@太丹6867：关于WESTERN BLOT的内参 -
沙毅13588341380…… 肯定要加二抗啊,内参和你的目的蛋白是一样的,也是一个蛋白,只不过表达比你的目的蛋白在各个组织之间恒定许多,它是你的目的蛋白的一个参照,但是它的作用和mark还不一样,所以内参是一定要要的,否则,人家会质疑你实验的可信性. 如果你的实验动物是大鼠,打个比方一抗是兔抗鼠吧或者其他的什么抗鼠的,二抗就是什么抗兔的,比如说羊抗兔之类,一抗最好买国外的,二抗国内的就可以了
@太丹6867：western blot电泳时内参上样量怎么确定 -
沙毅13588341380…… 内参一般情况下的定义是正常样品中本来就有的相对更为稳定存在分子.所以,你做好实验的“阳性对照”、“阴性对照”,然后保持与“试验处理样品”同样的样品上样量,再然后对pvdf膜进行剪切以及分别的抗体(内参抗体、目标蛋白的特异性抗体)孵育就可以很放心地做后续分析了.
@太丹6867：血清western blot怎样选择内参?
沙毅13588341380…… 用Tubulin或Actin的抗体.
@太丹6867：Western Blot都可以用beta - actin做内参吗? -
沙毅13588341380…… 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin 做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用: 1、如果目的蛋白检测不...
@太丹6867：Western blot 内参跑不齐怎么调整 -
沙毅13588341380…… 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...
@太丹6867：β - Actin抗体是Western Blot很好的内参指数,是啥意思?β - Actin在整个Western Blot的作用是什么?而且能不能详细介绍下Western Blot的抗体了?本人刚... - 作业帮
沙毅13588341380…… [答案] 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-Actin做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-Actin起到几个作用:1、如果目...
沙毅13588341380…… [答案] western blot用来检测蛋白表达的变化,而检测表达变化的前提就是,你每个孔跑得总蛋白量是相同的,如果上样量都不同,还怎么检测不同组间目的蛋白量的区别,这样内参就可以作为检测蛋白上样量是否相同的标准.内参一般选那...
@太丹6867：western blotting 中内参的作用是什么 -
沙毅13588341380…… 嗯,同意楼上的说法,内参一般都是选用细胞内表达稳定,表达量比较高的蛋白,比如一些骨架蛋白.这些蛋白一般认为不会因为实验处理,细胞状态不同而在总蛋白中的含量有大的起伏. 有内参的话,你的目的蛋白的表达的比较才有意义,否则的话,你说某一组的目标蛋白表达升高了,怎么排除你上样上多了的原因.
@太丹6867：Western Blot为什么必须要用内参 -
沙毅13588341380…… Western Blot为什么必须要用内参 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为WesternBlot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然...
@太丹6867：western blot 的一抗是内参抗体吗 -
沙毅13588341380…… 内参抗体是个什么鬼? 一抗就是你要检测的目的抗体. GAPDH作为内参的话,也是要孵它的一抗
@太丹6867：关于WESTERN BLOT的内参 -
沙毅13588341380…… 肯定要加二抗啊,内参和你的目的蛋白是一样的,也是一个蛋白,只不过表达比你的目的蛋白在各个组织之间恒定许多,它是你的目的蛋白的一个参照,但是它的作用和mark还不一样,所以内参是一定要要的,否则,人家会质疑你实验的可信性. 如果你的实验动物是大鼠,打个比方一抗是兔抗鼠吧或者其他的什么抗鼠的,二抗就是什么抗兔的,比如说羊抗兔之类,一抗最好买国外的,二抗国内的就可以了
@太丹6867：western blot电泳时内参上样量怎么确定 -
沙毅13588341380…… 内参一般情况下的定义是正常样品中本来就有的相对更为稳定存在分子.所以,你做好实验的“阳性对照”、“阴性对照”,然后保持与“试验处理样品”同样的样品上样量,再然后对pvdf膜进行剪切以及分别的抗体(内参抗体、目标蛋白的特异性抗体)孵育就可以很放心地做后续分析了.
@太丹6867：血清western blot怎样选择内参?
沙毅13588341380…… 用Tubulin或Actin的抗体.
@太丹6867：Western Blot都可以用beta - actin做内参吗? -
沙毅13588341380…… 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin 做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用: 1、如果目的蛋白检测不...
@太丹6867：Western blot 内参跑不齐怎么调整 -
沙毅13588341380…… 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...
@太丹6867：β - Actin抗体是Western Blot很好的内参指数,是啥意思?β - Actin在整个Western Blot的作用是什么?而且能不能详细介绍下Western Blot的抗体了?本人刚... - 作业帮
沙毅13588341380…… [答案] 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-Actin做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-Actin起到几个作用:1、如果目...
