western+chamber
@赫震2958：the western chamber和hamlet是什么意思? -
里逄13584171505…… 简单来说是 西方小房子 和 哈姆雷特~~
@赫震2958：western blot显色方法有哪几种 -
里逄13584171505…… 有很多种显示方法,其中HRP、化学发光检测(ECL、SuperSignal)居多,DAB显色很少见.主要分为两大类,分别介绍如下:化学发光Chemiluminescent:随着各大厂家努力开发研制灵敏度更高的发光底物,化学发光法的灵敏度已经达到pg级别,甚至还有 Femto级别的,灵敏度超过了同位素;底物显色Colormetirc/Chromogen:直接显色而操作简便且成本低.最为大家熟悉当数辣根过氧化物酶HRP(Horseradish Peroxidase,属于过氧化物酶POD类)和碱性磷酸酶AP(Alkaline Phosphatase):荧光标记显色:义翘大多WB抗体检测方式,见下图
@赫震2958：做western上样前样品要混匀吗 -
里逄13584171505…… Western Blot Quick Guide(以及一天跑完Western的时间规划) 前期准备:蛋白已经定量,各样本已经稀释到某固定浓度,已经和SDS loading buffer混合,已经分装好,保存与-20°.头天下午或晚上配胶,分离胶和浓缩胶一起配好,带上梳子...
@赫震2958：做western实验抗体用什么稀释 -
里逄13584171505…… 未纯化血清抗体做western blot时,需要先做梯度比例稀释的测试 不同的抗血清差别很大,先稀释到1000倍,再在其中选择梯度比例稀释.测试后找到最合适的稀释比例进行western blot检测
@赫震2958：如何用western来检测基因的磷酸化水平? -
里逄13584171505…… western一般是用来检测蛋白质的 蛋白质的磷酸化水平在western上可以通过分子量来区分 有时也可以用只识别磷酸化蛋白的抗体来区分
@赫震2958：western blot转膜的时候膜上的marker很明显.膜的背面基本上都能看见条带 -
里逄13584171505…… 做一下考马斯亮蓝染胶 看是不是全部转完了. 照您的描述,应该是转上了,可能是有点过.也可以做一下丽春红染膜,确认看看是不是转上了. 同意黑皮地雷的说法,Marker很容易转上的.
@赫震2958：western的图和SDS - PAGE图有什么区别 -
里逄13584171505…… SDS-PAGE 的图是依据蛋白质分子量的大小进行区分的蛋白质电泳结果,图中自上而下依据蛋白分子量大小分布着不同大小的蛋白分子条带(但如果是特殊情况,如:纯化后的蛋白,就可能只...
@赫震2958：western杂交出现分子量大于和小于预期蛋白的条带'原因是什么啊'? -
里逄13584171505…… 实际上来说,Western并不能对蛋白质的分子量进行测定,它只是利用一抗二抗显色的步骤从凝胶上定性找到某一蛋白质.所以分子量大小还是在于电泳的过程. 首先,从电泳的原理上讲,它通过带电基团在电场中的移动来测定分子量,蛋白质的构象(空间形态)对这个影响很大,球蛋白就会比线形蛋白显的分子量小.而且marker同样有这个问题. 另外,对于western来说,多数都是从生物体中(细胞裂解液)做全蛋白电泳,然后特异性检测某一蛋白的存在,正因如此,蛋白质的一级结构就显的很重要了,毕竟你的预期蛋白是唯一的,而生物表达的蛋白可能就会存在或多或少的差异,分子量自然也就不会完全匹配预期.
里逄13584171505…… 简单来说是 西方小房子 和 哈姆雷特~~
@赫震2958：western blot显色方法有哪几种 -
里逄13584171505…… 有很多种显示方法,其中HRP、化学发光检测(ECL、SuperSignal)居多,DAB显色很少见.主要分为两大类,分别介绍如下:化学发光Chemiluminescent:随着各大厂家努力开发研制灵敏度更高的发光底物,化学发光法的灵敏度已经达到pg级别,甚至还有 Femto级别的,灵敏度超过了同位素;底物显色Colormetirc/Chromogen:直接显色而操作简便且成本低.最为大家熟悉当数辣根过氧化物酶HRP(Horseradish Peroxidase,属于过氧化物酶POD类)和碱性磷酸酶AP(Alkaline Phosphatase):荧光标记显色:义翘大多WB抗体检测方式,见下图
@赫震2958：做western上样前样品要混匀吗 -
里逄13584171505…… Western Blot Quick Guide(以及一天跑完Western的时间规划) 前期准备:蛋白已经定量,各样本已经稀释到某固定浓度,已经和SDS loading buffer混合,已经分装好,保存与-20°.头天下午或晚上配胶,分离胶和浓缩胶一起配好,带上梳子...
@赫震2958：做western实验抗体用什么稀释 -
里逄13584171505…… 未纯化血清抗体做western blot时,需要先做梯度比例稀释的测试 不同的抗血清差别很大,先稀释到1000倍,再在其中选择梯度比例稀释.测试后找到最合适的稀释比例进行western blot检测
@赫震2958：如何用western来检测基因的磷酸化水平? -
里逄13584171505…… western一般是用来检测蛋白质的 蛋白质的磷酸化水平在western上可以通过分子量来区分 有时也可以用只识别磷酸化蛋白的抗体来区分
@赫震2958：western blot转膜的时候膜上的marker很明显.膜的背面基本上都能看见条带 -
里逄13584171505…… 做一下考马斯亮蓝染胶 看是不是全部转完了. 照您的描述,应该是转上了,可能是有点过.也可以做一下丽春红染膜,确认看看是不是转上了. 同意黑皮地雷的说法,Marker很容易转上的.
@赫震2958：western的图和SDS - PAGE图有什么区别 -
里逄13584171505…… SDS-PAGE 的图是依据蛋白质分子量的大小进行区分的蛋白质电泳结果,图中自上而下依据蛋白分子量大小分布着不同大小的蛋白分子条带(但如果是特殊情况,如:纯化后的蛋白,就可能只...
@赫震2958：western杂交出现分子量大于和小于预期蛋白的条带'原因是什么啊'? -
里逄13584171505…… 实际上来说,Western并不能对蛋白质的分子量进行测定,它只是利用一抗二抗显色的步骤从凝胶上定性找到某一蛋白质.所以分子量大小还是在于电泳的过程. 首先,从电泳的原理上讲,它通过带电基团在电场中的移动来测定分子量,蛋白质的构象(空间形态)对这个影响很大,球蛋白就会比线形蛋白显的分子量小.而且marker同样有这个问题. 另外,对于western来说,多数都是从生物体中(细胞裂解液)做全蛋白电泳,然后特异性检测某一蛋白的存在,正因如此,蛋白质的一级结构就显的很重要了,毕竟你的预期蛋白是唯一的,而生物表达的蛋白可能就会存在或多或少的差异,分子量自然也就不会完全匹配预期.
