双质粒系统
@甫界5283：细胞转染时遭遇细胞污染怎么办 -
时例18047152004…… 腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒,目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注.构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分,然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里.目前大多数生成...
@甫界5283：如何提高sgRNA的打靶效率 -
时例18047152004…… 为进一步提高CRISPR/Cas9系统的打靶效率,比较共质粒或双质粒表达Cas9内切酶和小向导RNA (sgRNA)的不同载体设计对其打靶效率的影响.方法:将针对AAVS1位点的2个sgRNA序列分别插入表达Cas9的质粒pSpCas9上,再将其构建为Cas9-sgRNA二合一的共质粒以及独立表达sgRNA和Cas9的双质粒系统;质粒转染293T细胞后,用T7E1酶切方法检测打靶效率.结果:不经过变性退火的PCR片段也能直接进行T7E1酶切;Cas9-sgRNA共质粒系统的打靶效率显著高于双质粒系统.
@甫界5283：质粒载体的分类 -
时例18047152004…… 按复制形式 分为严紧型和松弛型复制. 根据质粒DNA复制与宿主之间的关系或在宿主细胞的拷贝数的多少,可以将质粒分为两种不同的复制类型:严紧型和松弛型.严紧型质粒复制受宿主染色体DNA复制的严格控制,拷贝数较小一般只有1~3...
@甫界5283：请教一个双元表达载体的问题,双元表达载体系统代表农杆菌转化需要两个质粒吗? -
时例18047152004…… 双元表达载体系统其实是一个质粒,它包含两个部分,一个部分是能够被转移的T-DNA,另一个是能够帮助T-DNA转移的Vir区.T-DNA转移区是有左右边界的,在转基因时会在左右边界处断裂,只将左右边界以内的T-DNA区域整合到植物基因组中.
@甫界5283：酵母双杂交系统到底是啥回事?有啥用 -
时例18047152004…… 酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
@甫界5283：细菌的形态结构特点 -
时例18047152004…… 细菌结构分为表面结构、附件与内部结构.有些细菌在一定条件下能形成芽孢;芽孢形成后菌体逐渐消失.细菌的L型是细菌通过变异而产生的细胞壁缺陷型,也有致病作用.表面结构 有细胞壁和表面粘着物.①细胞壁.革兰氏阳性菌的细...
@甫界5283：有关细菌的知识? -
时例18047152004…… 细菌(学名:Bacteria)是指生物的主要类群之一,属于细菌域.也是所有生物中数量最多的一类,据估计,其总数约有5*10^30个.细菌的形状相当多样,主要有球状、杆状,以及螺旋状. 细菌也对人类活动有很大的影响.一方面,细菌是许...
@甫界5283：质粒图谱中的pcmv是什么意思 -
时例18047152004…… 没看过这文章,字面看意思如下: Pak4,应该是p21-activated kinase 4的缩写,理解为“受p21活化的激酶 4” pCMV-BD,是哺乳动物双杂交质粒的一方,BD指DNA binding domain,意思就是这个质粒带双杂交系统中DNA结合结构域的编码...
时例18047152004…… 腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒,目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注.构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分,然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里.目前大多数生成...
@甫界5283：如何提高sgRNA的打靶效率 -
时例18047152004…… 为进一步提高CRISPR/Cas9系统的打靶效率,比较共质粒或双质粒表达Cas9内切酶和小向导RNA (sgRNA)的不同载体设计对其打靶效率的影响.方法:将针对AAVS1位点的2个sgRNA序列分别插入表达Cas9的质粒pSpCas9上,再将其构建为Cas9-sgRNA二合一的共质粒以及独立表达sgRNA和Cas9的双质粒系统;质粒转染293T细胞后,用T7E1酶切方法检测打靶效率.结果:不经过变性退火的PCR片段也能直接进行T7E1酶切;Cas9-sgRNA共质粒系统的打靶效率显著高于双质粒系统.
@甫界5283：质粒载体的分类 -
时例18047152004…… 按复制形式 分为严紧型和松弛型复制. 根据质粒DNA复制与宿主之间的关系或在宿主细胞的拷贝数的多少,可以将质粒分为两种不同的复制类型:严紧型和松弛型.严紧型质粒复制受宿主染色体DNA复制的严格控制,拷贝数较小一般只有1~3...
@甫界5283：请教一个双元表达载体的问题,双元表达载体系统代表农杆菌转化需要两个质粒吗? -
时例18047152004…… 双元表达载体系统其实是一个质粒,它包含两个部分,一个部分是能够被转移的T-DNA,另一个是能够帮助T-DNA转移的Vir区.T-DNA转移区是有左右边界的,在转基因时会在左右边界处断裂,只将左右边界以内的T-DNA区域整合到植物基因组中.
@甫界5283：酵母双杂交系统到底是啥回事?有啥用 -
时例18047152004…… 酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
@甫界5283：细菌的形态结构特点 -
时例18047152004…… 细菌结构分为表面结构、附件与内部结构.有些细菌在一定条件下能形成芽孢;芽孢形成后菌体逐渐消失.细菌的L型是细菌通过变异而产生的细胞壁缺陷型,也有致病作用.表面结构 有细胞壁和表面粘着物.①细胞壁.革兰氏阳性菌的细...
@甫界5283：有关细菌的知识? -
时例18047152004…… 细菌(学名:Bacteria)是指生物的主要类群之一,属于细菌域.也是所有生物中数量最多的一类,据估计,其总数约有5*10^30个.细菌的形状相当多样,主要有球状、杆状,以及螺旋状. 细菌也对人类活动有很大的影响.一方面,细菌是许...
@甫界5283：质粒图谱中的pcmv是什么意思 -
时例18047152004…… 没看过这文章,字面看意思如下: Pak4,应该是p21-activated kinase 4的缩写,理解为“受p21活化的激酶 4” pCMV-BD,是哺乳动物双杂交质粒的一方,BD指DNA binding domain,意思就是这个质粒带双杂交系统中DNA结合结构域的编码...
