逆转录时间设置
@通莘300：RT - PCR原理及操作 -
吴饶15587122266…… 原理:RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条...
@通莘300：PT - PCR操作流程 -
吴饶15587122266…… 是RT-PCR啊. 一、实验器具与材料: 1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头:1ml、200μl、20μl 3、匀浆管:5ml 4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个 5、EP管:1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶:2个60ml的棕色...
@通莘300：做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? -
吴饶15587122266…… 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
@通莘300：多重荧光定量pcr 最多检测多少种 -
吴饶15587122266…… 这个看你自己的设置.qPCR仪一般是96孔板,最多有5个通道.理论上,你用一个通道作为内标,2个孔分别做阴阳性对照.那么可以做94*4=376个.当然这只是理论上的最大值,实际操作的时候受很多限制,如多重PCR之间的交叉反应导致无法合孔,样本量不足等.具体到肿瘤相关的突变检测试剂盒,目前拿到CFDA注册证的,最多的一个试剂盒可以同时检测54种突变.
@通莘300：如何提高Real - time PCR的灵敏度? -
吴饶15587122266…… 博凌科为-为你解答:提高体系的灵敏度,从优化体系开始,镁离子浓度,引物探针浓度等.以前公司的一步法RT-PCR荧光定量,在逆转录后,有五个三温度循环,这五个循环不检测荧光,然后再加上40个两温度循环,这40个循环检测荧 光.(这个增加循环数的方法,除非在比较严格的实验室可行,因为怕假阳性结果)而在样品处理过程中,提取RNA时,加糖原促进RNA更多的沉淀出来.糖原对提取细胞或者少量组织中的RNA有比较显著的效果.
@通莘300：定量pcr如果已经反转录,如何调量在做反转录之前没有定mrna?
吴饶15587122266…… 可以将RNA原液测一下OD值,根据260、280、320的数值计算出RNA浓度,然后调整反转录的反应体系,从而得到CDNA的量.没有定RNA的量的话,如果做相对定量是可以得出相对量值的,但是如果做绝对定量,就不能得出准确结果.
@通莘300：谁能帮忙翻译以下内容
吴饶15587122266…… RT:Reusable 热冷/白冷的治疗在布在 freezer.Wrap 中存储中介白和应用.如果应用程序变得很不舒服,删除包几分钟从受影响的地区然后再 apply.Persons 与循环问题 shouls 不使用冷压缩期望按照医生的指示热治疗方向微波说明: 地点中介白...
@通莘300：随机引物 之RT - PCR急急急急急!!!!! -
吴饶15587122266…… 就是使用许多随机的碱基组合的引物(随机组合丰富),一般6到8个碱基,许多随机引物组成的一套引物组,由于mRNA相对较长,随即引物与它结合的位点较多,从而很快反转录形成cDNA单链.
@通莘300：做real time pcr设定内对照时,内对照需要做复孔么 -
吴饶15587122266…… 当然要做复孔.
@通莘300：急性白血病
吴饶15587122266…… 一概述急性白血病(Acute leukemia,AL)是造血干细胞的恶性克隆性疾病,发病时骨髓中异常的原始细胞及幼稚细胞(白血病细胞)大量增殖,蓄积于骨髓并抑制正常造血,也可广泛浸润肝、脾、淋巴结等髓外脏器.表现为贫血、出血、感染和...
吴饶15587122266…… 原理:RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条...
@通莘300：PT - PCR操作流程 -
吴饶15587122266…… 是RT-PCR啊. 一、实验器具与材料: 1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头:1ml、200μl、20μl 3、匀浆管:5ml 4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个 5、EP管:1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶:2个60ml的棕色...
@通莘300：做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? -
吴饶15587122266…… 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
@通莘300：多重荧光定量pcr 最多检测多少种 -
吴饶15587122266…… 这个看你自己的设置.qPCR仪一般是96孔板,最多有5个通道.理论上,你用一个通道作为内标,2个孔分别做阴阳性对照.那么可以做94*4=376个.当然这只是理论上的最大值,实际操作的时候受很多限制,如多重PCR之间的交叉反应导致无法合孔,样本量不足等.具体到肿瘤相关的突变检测试剂盒,目前拿到CFDA注册证的,最多的一个试剂盒可以同时检测54种突变.
@通莘300：如何提高Real - time PCR的灵敏度? -
吴饶15587122266…… 博凌科为-为你解答:提高体系的灵敏度,从优化体系开始,镁离子浓度,引物探针浓度等.以前公司的一步法RT-PCR荧光定量,在逆转录后,有五个三温度循环,这五个循环不检测荧光,然后再加上40个两温度循环,这40个循环检测荧 光.(这个增加循环数的方法,除非在比较严格的实验室可行,因为怕假阳性结果)而在样品处理过程中,提取RNA时,加糖原促进RNA更多的沉淀出来.糖原对提取细胞或者少量组织中的RNA有比较显著的效果.
@通莘300：定量pcr如果已经反转录,如何调量在做反转录之前没有定mrna?
吴饶15587122266…… 可以将RNA原液测一下OD值,根据260、280、320的数值计算出RNA浓度,然后调整反转录的反应体系,从而得到CDNA的量.没有定RNA的量的话,如果做相对定量是可以得出相对量值的,但是如果做绝对定量,就不能得出准确结果.
@通莘300：谁能帮忙翻译以下内容
吴饶15587122266…… RT:Reusable 热冷/白冷的治疗在布在 freezer.Wrap 中存储中介白和应用.如果应用程序变得很不舒服,删除包几分钟从受影响的地区然后再 apply.Persons 与循环问题 shouls 不使用冷压缩期望按照医生的指示热治疗方向微波说明: 地点中介白...
@通莘300：随机引物 之RT - PCR急急急急急!!!!! -
吴饶15587122266…… 就是使用许多随机的碱基组合的引物(随机组合丰富),一般6到8个碱基,许多随机引物组成的一套引物组,由于mRNA相对较长,随即引物与它结合的位点较多,从而很快反转录形成cDNA单链.
@通莘300：做real time pcr设定内对照时,内对照需要做复孔么 -
吴饶15587122266…… 当然要做复孔.
@通莘300：急性白血病
吴饶15587122266…… 一概述急性白血病(Acute leukemia,AL)是造血干细胞的恶性克隆性疾病,发病时骨髓中异常的原始细胞及幼稚细胞(白血病细胞)大量增殖,蓄积于骨髓并抑制正常造血,也可广泛浸润肝、脾、淋巴结等髓外脏器.表现为贫血、出血、感染和...
