逆转录条件设置
@狄褚734：RNA逆转录时反应条件被人改了,反复跑了7次,cDNA还能用吗? -
蔺官18228673477…… 如果只是多了七倍的循环的话(大概200个循环以内吧),可以用(放心吧,不好用的).如果改了其他的条件就不靠谱了.
@狄褚734：做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? -
蔺官18228673477…… 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
@狄褚734：PT - PCR操作流程 -
蔺官18228673477…… 是RT-PCR啊. 一、实验器具与材料: 1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头:1ml、200μl、20μl 3、匀浆管:5ml 4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个 5、EP管:1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶:2个60ml的棕色...
@狄褚734：简述建立pcr反应体系时需注意哪些问题 -
蔺官18228673477…… 标准的PCR反应体系:10*扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、...
@狄褚734：反转录酶 - 什么是反转录PCR?
蔺官18228673477…… 逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补...
@狄褚734：逆转录中,RNA生成DNA会进入细胞核,基因工程可以将细胞核设计成只允许RNA出来,而不允许DNA进去的结构呢 -
蔺官18228673477…… 你的问题,前提就错了:能发生逆转录的一定是遗传物质为RNA的生物,这一定是病毒(因为所有的细胞生物都含有DNA和RNA两种核酸,遗传物质是DNA),那么该生物部具细胞结构,无细胞核,也就不存在逆转录产生的DNA进入细胞核的说法. 另外,大分子物质进出细胞核是通过核孔进行的,现在还没有说是能通过基因工程使得核孔消失的.
@狄褚734：RNA逆转录升温程序各阶段的作用 -
蔺官18228673477…… 常温使引物和膜板结合,42度是逆转录酶工作温度,用于合成cDNA,高温使第一链与mRNA解链,4度是保存温度.
@狄褚734：定量pcr如果已经反转录,如何调量在做反转录之前没有定mrna?
蔺官18228673477…… 可以将RNA原液测一下OD值,根据260、280、320的数值计算出RNA浓度,然后调整反转录的反应体系,从而得到CDNA的量.没有定RNA的量的话,如果做相对定量是可以得出相对量值的,但是如果做绝对定量,就不能得出准确结果.
@狄褚734：什么是病毒? -
蔺官18228673477…… 病毒是一种个体微小,结构简单,只含一种核酸(DNA或RNA),必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物. 病毒是一种非细胞生命形态,它由一个核酸长链和蛋白质外壳构成,病毒没有自己的代谢机构,没有酶系统.因此病毒...
@狄褚734：逆转录PCR常应用于什么技术?
蔺官18228673477…… 2.逆转录PCR(RTPCR):以由mRNA逆转录而来的DNA为模板,由此产生出来的DNA不带有内含子(基因中不具意义的段落),常应用于分子克隆技术
蔺官18228673477…… 如果只是多了七倍的循环的话(大概200个循环以内吧),可以用(放心吧,不好用的).如果改了其他的条件就不靠谱了.
@狄褚734：做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? -
蔺官18228673477…… 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
@狄褚734：PT - PCR操作流程 -
蔺官18228673477…… 是RT-PCR啊. 一、实验器具与材料: 1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头:1ml、200μl、20μl 3、匀浆管:5ml 4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个 5、EP管:1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶:2个60ml的棕色...
@狄褚734：简述建立pcr反应体系时需注意哪些问题 -
蔺官18228673477…… 标准的PCR反应体系:10*扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、...
@狄褚734：反转录酶 - 什么是反转录PCR?
蔺官18228673477…… 逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补...
@狄褚734：逆转录中,RNA生成DNA会进入细胞核,基因工程可以将细胞核设计成只允许RNA出来,而不允许DNA进去的结构呢 -
蔺官18228673477…… 你的问题,前提就错了:能发生逆转录的一定是遗传物质为RNA的生物,这一定是病毒(因为所有的细胞生物都含有DNA和RNA两种核酸,遗传物质是DNA),那么该生物部具细胞结构,无细胞核,也就不存在逆转录产生的DNA进入细胞核的说法. 另外,大分子物质进出细胞核是通过核孔进行的,现在还没有说是能通过基因工程使得核孔消失的.
@狄褚734：RNA逆转录升温程序各阶段的作用 -
蔺官18228673477…… 常温使引物和膜板结合,42度是逆转录酶工作温度,用于合成cDNA,高温使第一链与mRNA解链,4度是保存温度.
@狄褚734：定量pcr如果已经反转录,如何调量在做反转录之前没有定mrna?
蔺官18228673477…… 可以将RNA原液测一下OD值,根据260、280、320的数值计算出RNA浓度,然后调整反转录的反应体系,从而得到CDNA的量.没有定RNA的量的话,如果做相对定量是可以得出相对量值的,但是如果做绝对定量,就不能得出准确结果.
@狄褚734：什么是病毒? -
蔺官18228673477…… 病毒是一种个体微小,结构简单,只含一种核酸(DNA或RNA),必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物. 病毒是一种非细胞生命形态,它由一个核酸长链和蛋白质外壳构成,病毒没有自己的代谢机构,没有酶系统.因此病毒...
@狄褚734：逆转录PCR常应用于什么技术?
蔺官18228673477…… 2.逆转录PCR(RTPCR):以由mRNA逆转录而来的DNA为模板,由此产生出来的DNA不带有内含子(基因中不具意义的段落),常应用于分子克隆技术
