iptg终浓度对少最合适
@夹柿1482：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
家胀13959476075…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@夹柿1482：IPTG表达包涵体 最佳浓度是多少?越高越好吗?跪谢~我最近在用MBP tag表达一种外源蛋白,是包涵体形式.用1mM IPTG 37度有很好的表达量,而100uM ... - 作业帮
家胀13959476075…… [答案] 一般表达蛋白摸条件都需要做个梯度.你做个IPTG浓度梯度就好了.
@夹柿1482：蛋白质表达一般的条件? -
家胀13959476075…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@夹柿1482：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
家胀13959476075…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@夹柿1482：现有1M IPTG,加到5ml培养基中,使终浓度为1mmol/L ,加多少?怎么算的?不要讲述,要公式计算 - 作业帮
家胀13959476075…… [答案] 加0.005ml.公式:1M*0.005ml/5ml=1mmol/L
@夹柿1482：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
家胀13959476075…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@夹柿1482：iptg的配制浓度,可以高温灭菌吗 -
家胀13959476075…… 把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存.然后在100 ml的琼脂培养基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基.配制好后保存于-20°C,室温可放置一个月.虽然IPTG 比较稳定,但高温灭菌仍然是不适合的.
@夹柿1482：24mg/ml IPTG怎样配成1mM浓度丁香园 -
家胀13959476075…… 要将24mg/ml IPTG配成1mM浓度,可以按照以下步骤进行:1. 确定需要配制的iptg溶液体积,假设为100毫升.2. 计算需要多少克iptg,即100毫升*10*0.001*24mg,得出结果为0.0000024克.3. 将这么多iptg溶于10毫升无水乙醇中,然后定容到10毫升.这样,就可以将24mg/ml IPTG配成1mM浓度.
@夹柿1482：PCR时Mg离子怎样定量最合适 -
家胀13959476075…… 最适合的浓度应该是通过试验摸索获得的,基本上它应该介于1 mM到5 mM之间.最常用的比例是MgCl2浓度1.5 mM(以上均指终浓度)有些酶需要2.5mM,有些是1.5mM 其实,买那些配套好的酶和buffer(含Mg2+)直接用就好了~~
@夹柿1482：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
家胀13959476075…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
家胀13959476075…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@夹柿1482：IPTG表达包涵体 最佳浓度是多少?越高越好吗?跪谢~我最近在用MBP tag表达一种外源蛋白,是包涵体形式.用1mM IPTG 37度有很好的表达量,而100uM ... - 作业帮
家胀13959476075…… [答案] 一般表达蛋白摸条件都需要做个梯度.你做个IPTG浓度梯度就好了.
@夹柿1482：蛋白质表达一般的条件? -
家胀13959476075…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@夹柿1482：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
家胀13959476075…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@夹柿1482：现有1M IPTG,加到5ml培养基中,使终浓度为1mmol/L ,加多少?怎么算的?不要讲述,要公式计算 - 作业帮
家胀13959476075…… [答案] 加0.005ml.公式:1M*0.005ml/5ml=1mmol/L
@夹柿1482：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
家胀13959476075…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@夹柿1482：iptg的配制浓度,可以高温灭菌吗 -
家胀13959476075…… 把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存.然后在100 ml的琼脂培养基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基.配制好后保存于-20°C,室温可放置一个月.虽然IPTG 比较稳定,但高温灭菌仍然是不适合的.
@夹柿1482：24mg/ml IPTG怎样配成1mM浓度丁香园 -
家胀13959476075…… 要将24mg/ml IPTG配成1mM浓度,可以按照以下步骤进行:1. 确定需要配制的iptg溶液体积,假设为100毫升.2. 计算需要多少克iptg,即100毫升*10*0.001*24mg,得出结果为0.0000024克.3. 将这么多iptg溶于10毫升无水乙醇中,然后定容到10毫升.这样,就可以将24mg/ml IPTG配成1mM浓度.
@夹柿1482：PCR时Mg离子怎样定量最合适 -
家胀13959476075…… 最适合的浓度应该是通过试验摸索获得的,基本上它应该介于1 mM到5 mM之间.最常用的比例是MgCl2浓度1.5 mM(以上均指终浓度)有些酶需要2.5mM,有些是1.5mM 其实,买那些配套好的酶和buffer(含Mg2+)直接用就好了~~
@夹柿1482：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
家胀13959476075…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
