iptg诱导温度怎么决定
@家典5090：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
奚劳18966942628…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@家典5090：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
奚劳18966942628…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@家典5090：谁能给我解释一下什么叫冷诱导,要怎么做? -
奚劳18966942628…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导.可以尝试25C,20C,我们以前实验室还尝试过18C和16C,只是这样培养时间就需要比较长,需要过夜.
@家典5090：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
奚劳18966942628…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@家典5090：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
奚劳18966942628…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@家典5090：蛋白质表达一般的条件? -
奚劳18966942628…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@家典5090：转染目的基因进入靶细胞,目的基因的表达由什么启动 -
奚劳18966942628…… 看你前面用的是很么启动子,如果是持续表达的启动子,目的基因进入靶细胞后会自动表达.如果是诱导表达的,可能根据启动子的不同,有的是IPTG诱导表达,有的是铜离子诱导表达,有的是温度改变,temperature shift以后会表达
@家典5090：做低温诱导需要加iptg吗 - 作业帮
奚劳18966942628…… [答案] 需要的 低温诱导可以降低IPTG的量,比如0.1mM IPTG,延长诱导时间,比如12~16小时. 不加IPTG的话只有极个别情况下会出现泄漏表达.一般都是不表达的.
@家典5090：请问IPTG能否在4℃诱导融合蛋白表达??? -
奚劳18966942628…… 条带亮不亮应该是根据你诱导的蛋白好不好表达而定的.你放冰箱后,IPTG在摇菌的时候就诱导表达.
@家典5090：PGEX系列表达载体的特点 -
奚劳18966942628…… pgex特点就是带有GST标签,可以增加目的蛋白的溶解度,别的没什么特点,属于大众型载体,目前也较常使用.你说的没有表达有没有做全菌的sds-page啊,不管是不是形成包涵体全菌电泳都应该有条带,至于形不形成包涵体就取决于你的...
奚劳18966942628…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@家典5090：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
奚劳18966942628…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@家典5090：谁能给我解释一下什么叫冷诱导,要怎么做? -
奚劳18966942628…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导.可以尝试25C,20C,我们以前实验室还尝试过18C和16C,只是这样培养时间就需要比较长,需要过夜.
@家典5090：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
奚劳18966942628…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@家典5090：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
奚劳18966942628…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@家典5090：蛋白质表达一般的条件? -
奚劳18966942628…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@家典5090：转染目的基因进入靶细胞,目的基因的表达由什么启动 -
奚劳18966942628…… 看你前面用的是很么启动子,如果是持续表达的启动子,目的基因进入靶细胞后会自动表达.如果是诱导表达的,可能根据启动子的不同,有的是IPTG诱导表达,有的是铜离子诱导表达,有的是温度改变,temperature shift以后会表达
@家典5090：做低温诱导需要加iptg吗 - 作业帮
奚劳18966942628…… [答案] 需要的 低温诱导可以降低IPTG的量,比如0.1mM IPTG,延长诱导时间,比如12~16小时. 不加IPTG的话只有极个别情况下会出现泄漏表达.一般都是不表达的.
@家典5090：请问IPTG能否在4℃诱导融合蛋白表达??? -
奚劳18966942628…… 条带亮不亮应该是根据你诱导的蛋白好不好表达而定的.你放冰箱后,IPTG在摇菌的时候就诱导表达.
@家典5090：PGEX系列表达载体的特点 -
奚劳18966942628…… pgex特点就是带有GST标签,可以增加目的蛋白的溶解度,别的没什么特点,属于大众型载体,目前也较常使用.你说的没有表达有没有做全菌的sds-page啊,不管是不是形成包涵体全菌电泳都应该有条带,至于形不形成包涵体就取决于你的...
