iptg诱导多长时间合适
@向支6726：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
微浅13745623074…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@向支6726：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
微浅13745623074…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@向支6726：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
微浅13745623074…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@向支6726：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
微浅13745623074…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@向支6726：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
微浅13745623074…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@向支6726：蛋白质表达一般的条件? -
微浅13745623074…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@向支6726：原核表达没有目的条带!!!! -
微浅13745623074…… IPTG的浓度高了吧,形成包涵体了降低IPTG浓度和诱导温度,掌握好诱导时间试试
@向支6726：细菌flag蛋白纯化用什么菌株和载体 -
微浅13745623074…… 3,重复(3)的步骤进行SDS-PAGE分析;ml 卡那霉素存储液,若转化DH5α.当需要表达蛋白时.750μl20mMTris-HCl,Western 印迹;ml乙酰BSA(根据需要补足水到30μl2)37℃温浴2-4h3)取3μl样品进行电泳检测消化反应进行的程度4)消...
@向支6726：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
微浅13745623074…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@向支6726：iptg诱导前后在SDS电泳结果中怎么看 - 作业帮
微浅13745623074…… [答案] 加入IPTG后有目标蛋白表达,正常情况下,两个泳道相比,应该能在诱导后的泳道看到有某一个比较明显的蛋白条带的增粗.这个条带的位置可以根据目标蛋白的预计分子量大小来找,当然有时候不是严格与预测分子量一致,会多少有点出入,但是...
微浅13745623074…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@向支6726：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
微浅13745623074…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@向支6726：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
微浅13745623074…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@向支6726：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
微浅13745623074…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@向支6726：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
微浅13745623074…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@向支6726：蛋白质表达一般的条件? -
微浅13745623074…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@向支6726：原核表达没有目的条带!!!! -
微浅13745623074…… IPTG的浓度高了吧,形成包涵体了降低IPTG浓度和诱导温度,掌握好诱导时间试试
@向支6726：细菌flag蛋白纯化用什么菌株和载体 -
微浅13745623074…… 3,重复(3)的步骤进行SDS-PAGE分析;ml 卡那霉素存储液,若转化DH5α.当需要表达蛋白时.750μl20mMTris-HCl,Western 印迹;ml乙酰BSA(根据需要补足水到30μl2)37℃温浴2-4h3)取3μl样品进行电泳检测消化反应进行的程度4)消...
@向支6726：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
微浅13745623074…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@向支6726：iptg诱导前后在SDS电泳结果中怎么看 - 作业帮
微浅13745623074…… [答案] 加入IPTG后有目标蛋白表达,正常情况下,两个泳道相比,应该能在诱导后的泳道看到有某一个比较明显的蛋白条带的增粗.这个条带的位置可以根据目标蛋白的预计分子量大小来找,当然有时候不是严格与预测分子量一致,会多少有点出入,但是...
