诱导表达时间过长
@方琦4694：诱导的mrna表达随时间延长为什么会下降 -
洪沾13541469353…… 因为生物的mrna随表达进行表达活性下降,这与自由基等都有关,酶活性的下降也有一定关系
@方琦4694：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
洪沾13541469353…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@方琦4694：一般细胞因子诱导基因表达,要处理细胞多长 -
洪沾13541469353…… 不一定,有些是直接诱导的,需要时间短,有些是间接诱导的,需要时间长一点.一般在0-24h范围内就差不多.
@方琦4694：(2014?海南模拟)藜是一种耐旱且在一定环境条件下耐旱性可变的植物,为了研究干旱对藜干旱诱导蛋白基因 -
洪沾13541469353…… (1)由题目所给实验第二步可知该实验中自变量为PEG浓度,第三步可知因变量是细胞中的可溶性蛋白产生量,其它均为无关变量,包括叶片的数量和大小,幼苗的数量、叶片部位、塑料盒的大小等. (2)因为土壤中含有很多未知因素的化合物...
@方琦4694：诱导时脑缺氧?
洪沾13541469353…… 若诱导时间过长,或插管时间过长,肯定会引起脑供氧不足,这是毫无疑问的.但过度换气的最重要的目的就是增加氧储备,而诱导引起的低血压是需要采取有效措施加以预防的,一般最好使血压适度下降,不低于基础血压的30%最好,一般不会对脑血流有明显的影响.
@方琦4694：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
洪沾13541469353…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@方琦4694：蛋白质表达一般的条件? -
洪沾13541469353…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@方琦4694：谁能给我解释一下什么叫冷诱导,要怎么做? -
洪沾13541469353…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导.可以尝试25C,20C,我们以前实验室还尝试过18C和16C,只是这样培养时间就需要比较长,需要过夜.
@方琦4694：tet - on是什么?求解 -
洪沾13541469353…… 简单的说,就是将带有tet-on的载体连上目的基因并转入细胞后,需在培养基中加入四环素才能诱导目的基因的表达.与之相对的还有tet-off系统.这种表达系统可以使目的基因在诱导情况下才会表达,即能人为控制其表达时间.这在分子实验中可以起到很大的作用.
@方琦4694：影响诱导效果的因素是什么?
洪沾13541469353…… 大体有以下几个.1.处理时机由于秋水仙素只对正在分裂的细胞有影响,而对相对... 如果处理时间过长,又会因药害而导致处理材料死亡,或造成染色体的再加倍.若是...
洪沾13541469353…… 因为生物的mrna随表达进行表达活性下降,这与自由基等都有关,酶活性的下降也有一定关系
@方琦4694：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
洪沾13541469353…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@方琦4694：一般细胞因子诱导基因表达,要处理细胞多长 -
洪沾13541469353…… 不一定,有些是直接诱导的,需要时间短,有些是间接诱导的,需要时间长一点.一般在0-24h范围内就差不多.
@方琦4694：(2014?海南模拟)藜是一种耐旱且在一定环境条件下耐旱性可变的植物,为了研究干旱对藜干旱诱导蛋白基因 -
洪沾13541469353…… (1)由题目所给实验第二步可知该实验中自变量为PEG浓度,第三步可知因变量是细胞中的可溶性蛋白产生量,其它均为无关变量,包括叶片的数量和大小,幼苗的数量、叶片部位、塑料盒的大小等. (2)因为土壤中含有很多未知因素的化合物...
@方琦4694：诱导时脑缺氧?
洪沾13541469353…… 若诱导时间过长,或插管时间过长,肯定会引起脑供氧不足,这是毫无疑问的.但过度换气的最重要的目的就是增加氧储备,而诱导引起的低血压是需要采取有效措施加以预防的,一般最好使血压适度下降,不低于基础血压的30%最好,一般不会对脑血流有明显的影响.
@方琦4694：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
洪沾13541469353…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@方琦4694：蛋白质表达一般的条件? -
洪沾13541469353…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@方琦4694：谁能给我解释一下什么叫冷诱导,要怎么做? -
洪沾13541469353…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导.可以尝试25C,20C,我们以前实验室还尝试过18C和16C,只是这样培养时间就需要比较长,需要过夜.
@方琦4694：tet - on是什么?求解 -
洪沾13541469353…… 简单的说,就是将带有tet-on的载体连上目的基因并转入细胞后,需在培养基中加入四环素才能诱导目的基因的表达.与之相对的还有tet-off系统.这种表达系统可以使目的基因在诱导情况下才会表达,即能人为控制其表达时间.这在分子实验中可以起到很大的作用.
@方琦4694：影响诱导效果的因素是什么?
洪沾13541469353…… 大体有以下几个.1.处理时机由于秋水仙素只对正在分裂的细胞有影响,而对相对... 如果处理时间过长,又会因药害而导致处理材料死亡,或造成染色体的再加倍.若是...
