iptg诱导多少小时合适
@裴力940：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
温欢19258567934…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@裴力940：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
温欢19258567934…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@裴力940：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
温欢19258567934…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@裴力940：做低温诱导需要加iptg吗 - 作业帮
温欢19258567934…… [答案] 需要的 低温诱导可以降低IPTG的量,比如0.1mM IPTG,延长诱导时间,比如12~16小时. 不加IPTG的话只有极个别情况下会出现泄漏表达.一般都是不表达的.
@裴力940：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
温欢19258567934…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@裴力940：蛋白质表达一般的条件? -
温欢19258567934…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@裴力940：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
温欢19258567934…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@裴力940：原核表达没有目的条带!!!! -
温欢19258567934…… IPTG的浓度高了吧,形成包涵体了降低IPTG浓度和诱导温度,掌握好诱导时间试试
@裴力940：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
温欢19258567934…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@裴力940：为什么一般一个受体菌只导入一个载体质粒? -
温欢19258567934…… 我的看法是在转化的过程中,大多数细菌是接收不到外源的质粒的,只有少部分的细菌能够接收到,而在其中接收到1个质粒的细菌又最多(当然也有可能一个细菌收到2个或以上个大质粒,但是几率更低)当然,如果一个细菌内有多个质粒,每个ada基因仍然可能都得到表达.pET28b靠IPTG来诱导,而且一般培养都需要几个小时的时间.在这种诱导剂的存在下,几小时后还有质粒没有得到表达的几率几乎是0.换句话说,所有的ada基因都得到了表达 求采纳
温欢19258567934…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@裴力940：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
温欢19258567934…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@裴力940：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
温欢19258567934…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@裴力940：做低温诱导需要加iptg吗 - 作业帮
温欢19258567934…… [答案] 需要的 低温诱导可以降低IPTG的量,比如0.1mM IPTG,延长诱导时间,比如12~16小时. 不加IPTG的话只有极个别情况下会出现泄漏表达.一般都是不表达的.
@裴力940：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
温欢19258567934…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@裴力940：蛋白质表达一般的条件? -
温欢19258567934…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@裴力940：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
温欢19258567934…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@裴力940：原核表达没有目的条带!!!! -
温欢19258567934…… IPTG的浓度高了吧,形成包涵体了降低IPTG浓度和诱导温度,掌握好诱导时间试试
@裴力940：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
温欢19258567934…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@裴力940：为什么一般一个受体菌只导入一个载体质粒? -
温欢19258567934…… 我的看法是在转化的过程中,大多数细菌是接收不到外源的质粒的,只有少部分的细菌能够接收到,而在其中接收到1个质粒的细菌又最多(当然也有可能一个细菌收到2个或以上个大质粒,但是几率更低)当然,如果一个细菌内有多个质粒,每个ada基因仍然可能都得到表达.pET28b靠IPTG来诱导,而且一般培养都需要几个小时的时间.在这种诱导剂的存在下,几小时后还有质粒没有得到表达的几率几乎是0.换句话说,所有的ada基因都得到了表达 求采纳
