iptg的常用终浓度
@俟薛903：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
龙使15630581107…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@俟薛903：蛋白质表达一般的条件? -
龙使15630581107…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@俟薛903：IPTG表达包涵体 最佳浓度是多少?越高越好吗?跪谢~我最近在用MBP tag表达一种外源蛋白,是包涵体形式.用1mM IPTG 37度有很好的表达量,而100uM ... - 作业帮
龙使15630581107…… [答案] 一般表达蛋白摸条件都需要做个梯度.你做个IPTG浓度梯度就好了.
@俟薛903：现有1M IPTG,加到5ml培养基中,使终浓度为1mmol/L ,加多少?怎么算的?谢谢.不要讲述,要公式计算 -
龙使15630581107…… 加0.005ml. 公式:1M*0.005ml/5ml=1mmol/L
@俟薛903：iptg的配制浓度,可以高温灭菌吗 -
龙使15630581107…… 把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存.然后在100 ml的琼脂培养基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基.配制好后保存于-20°C,室温可放置一个月.虽然IPTG 比较稳定,但高温灭菌仍然是不适合的.
@俟薛903：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
龙使15630581107…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@俟薛903：pproex - 1和pet - 30b载体的区别 -
龙使15630581107…… PET系列是IPTG诱导表达的,一般构建了PET表达载体导入表达宿主菌(BL21等),用LB培养基在37度液体培养到OD600值0.7左右的时候,加入终浓度为0.1-1.0mM的IPTG(浓度对诱导表达影响不是很大,对于PET系统,对IPTG浓度要求稍...
@俟薛903：1mmiptg=多少mgiptg -
龙使15630581107…… 氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml.分装成小份于-20℃贮存.常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基.羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐...
@俟薛903：谁有生物上蓝白斑实验设计 -
龙使15630581107…… 这是我自己实验用的过程. 感受态细胞的制备(冰上操作) 1、从-40℃冰箱中取出保存的DH5α菌种,解冻. 2、吸取1ml解冻的菌液接种到50mlLB培养基中,37℃ 200r/min过夜培养(大约16h). 3、取过夜培养的菌液按1:30(过夜菌:液体...
@俟薛903：诱导大肠杆菌表达时IPTG的量 -
龙使15630581107…… 50ug/ml,之前做过的
龙使15630581107…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@俟薛903：蛋白质表达一般的条件? -
龙使15630581107…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@俟薛903：IPTG表达包涵体 最佳浓度是多少?越高越好吗?跪谢~我最近在用MBP tag表达一种外源蛋白,是包涵体形式.用1mM IPTG 37度有很好的表达量,而100uM ... - 作业帮
龙使15630581107…… [答案] 一般表达蛋白摸条件都需要做个梯度.你做个IPTG浓度梯度就好了.
@俟薛903：现有1M IPTG,加到5ml培养基中,使终浓度为1mmol/L ,加多少?怎么算的?谢谢.不要讲述,要公式计算 -
龙使15630581107…… 加0.005ml. 公式:1M*0.005ml/5ml=1mmol/L
@俟薛903：iptg的配制浓度,可以高温灭菌吗 -
龙使15630581107…… 把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存.然后在100 ml的琼脂培养基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基.配制好后保存于-20°C,室温可放置一个月.虽然IPTG 比较稳定,但高温灭菌仍然是不适合的.
@俟薛903：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
龙使15630581107…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@俟薛903：pproex - 1和pet - 30b载体的区别 -
龙使15630581107…… PET系列是IPTG诱导表达的,一般构建了PET表达载体导入表达宿主菌(BL21等),用LB培养基在37度液体培养到OD600值0.7左右的时候,加入终浓度为0.1-1.0mM的IPTG(浓度对诱导表达影响不是很大,对于PET系统,对IPTG浓度要求稍...
@俟薛903：1mmiptg=多少mgiptg -
龙使15630581107…… 氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml.分装成小份于-20℃贮存.常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基.羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐...
@俟薛903：谁有生物上蓝白斑实验设计 -
龙使15630581107…… 这是我自己实验用的过程. 感受态细胞的制备(冰上操作) 1、从-40℃冰箱中取出保存的DH5α菌种,解冻. 2、吸取1ml解冻的菌液接种到50mlLB培养基中,37℃ 200r/min过夜培养(大约16h). 3、取过夜培养的菌液按1:30(过夜菌:液体...
@俟薛903：诱导大肠杆菌表达时IPTG的量 -
龙使15630581107…… 50ug/ml,之前做过的
