iptg一般诱导多长时间
@李盾6372：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
扶泄15279982612…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@李盾6372：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
扶泄15279982612…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@李盾6372：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
扶泄15279982612…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@李盾6372：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
扶泄15279982612…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@李盾6372：蛋白质表达一般的条件? -
扶泄15279982612…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@李盾6372：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
扶泄15279982612…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@李盾6372：原核表达没有目的条带!!!! -
扶泄15279982612…… IPTG的浓度高了吧,形成包涵体了降低IPTG浓度和诱导温度,掌握好诱导时间试试
@李盾6372：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
扶泄15279982612…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@李盾6372：IPTG诱导后为什么要进行SDS - PAGE检测? -
扶泄15279982612…… IPTG诱导后一般为胞内表达. 1.检验蛋白的表达:取微量菌液,离心收获菌体,然后用PBS 之类重悬,洗涤菌体若干次,加入与菌液等量的PBS,取菌悬液与上样buffer混合,100度3min,取上清上样.对照为未诱导的菌体. 2.蛋白的可溶性鉴定:离心取菌体后,用PBS重悬,超声破碎,分离上清和残片,上清直接制样;残片需再次重悬后,制样上样.观察上清和残片中条带的情况.
@李盾6372：真核生物的基因在E.coli中如何表达 -
扶泄15279982612…… 首先提取你要的目标真核生物的mRNA,然后做反转录PCR,设计引物的时候注意上游引物要包含启动子和下游引物要包含终止子,这样才能获得完整的编码序列.然后你需要将你的反转录PCR产物进行序列测定,当然如果你这个是已知序列则...
扶泄15279982612…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@李盾6372：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
扶泄15279982612…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@李盾6372：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
扶泄15279982612…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@李盾6372：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
扶泄15279982612…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@李盾6372：蛋白质表达一般的条件? -
扶泄15279982612…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@李盾6372：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
扶泄15279982612…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@李盾6372：原核表达没有目的条带!!!! -
扶泄15279982612…… IPTG的浓度高了吧,形成包涵体了降低IPTG浓度和诱导温度,掌握好诱导时间试试
@李盾6372：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
扶泄15279982612…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@李盾6372：IPTG诱导后为什么要进行SDS - PAGE检测? -
扶泄15279982612…… IPTG诱导后一般为胞内表达. 1.检验蛋白的表达:取微量菌液,离心收获菌体,然后用PBS 之类重悬,洗涤菌体若干次,加入与菌液等量的PBS,取菌悬液与上样buffer混合,100度3min,取上清上样.对照为未诱导的菌体. 2.蛋白的可溶性鉴定:离心取菌体后,用PBS重悬,超声破碎,分离上清和残片,上清直接制样;残片需再次重悬后,制样上样.观察上清和残片中条带的情况.
@李盾6372：真核生物的基因在E.coli中如何表达 -
扶泄15279982612…… 首先提取你要的目标真核生物的mRNA,然后做反转录PCR,设计引物的时候注意上游引物要包含启动子和下游引物要包含终止子,这样才能获得完整的编码序列.然后你需要将你的反转录PCR产物进行序列测定,当然如果你这个是已知序列则...
