iptg诱导需要加多少
@笪怕5379：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
亓威13461649938…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@笪怕5379：诱导时加半乳糖多少 能一起灭菌吗 -
亓威13461649938…… 不一起灭菌.培养基灭菌后加入微孔滤膜过滤除菌的IPTG,也可在菌液中加入IPTG.做大肠杆菌诱导时,加入至终浓度0.5mM~0.8mM.
@笪怕5379：诱导大肠杆菌表达时IPTG的量 -
亓威13461649938…… 50ug/ml,之前做过的
@笪怕5379：为什么在做原核表达SDS - PAGE时对照的还要做个加诱导剂的呢,那诱导剂加多少才好呢, -
亓威13461649938…… 因为你做的并不是纯化的蛋白电泳,而是菌体的总蛋白,如果不作对照的话,就不能说明哪个条带是你的目的基因的特异表达. 如果做目的基因不加诱导剂的对照的话,可以看出目的基因在不诱导下的本底表达水平.也可以看出诱导剂的作用. 我们实验室就是那么做的,有时候还会加空菌(宿主菌)的对照.
@笪怕5379：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
亓威13461649938…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@笪怕5379：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
亓威13461649938…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@笪怕5379：葡萄糖和乳糖细菌iptg怎么诱导 -
亓威13461649938…… IPTG不被菌体代谢,为乳糖类似物,一旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果,所以IPTG的诱导效率高,往往只需要很少量(1mmol/L)即可达到理想诱导效果.由于IPTG不被代谢,在胞内专一诱导外源蛋白的表达.不受细胞代谢的影响,诱导效果持续稳定.乳糖有双效作用,既能做为诱导剂异乳糖的前体物质,又可以做碳源,在诱导过程中,很不稳定,IPTG因其优异的稳定性决定了它适合做实验研究用.但是IPTG价格高,且有毒性,限制了其工业化大生产.
@笪怕5379：蛋白质表达一般的条件? -
亓威13461649938…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@笪怕5379：做低温诱导需要加iptg吗 - 作业帮
亓威13461649938…… [答案] 需要的 低温诱导可以降低IPTG的量,比如0.1mM IPTG,延长诱导时间,比如12~16小时. 不加IPTG的话只有极个别情况下会出现泄漏表达.一般都是不表达的.
@笪怕5379：高葡萄糖含量的培养基能IPTG诱导吗 -
亓威13461649938…… 要看是用什么方式培养,那个阶段诱导,工程菌的特性.例如,用发酵罐发酵诱导的话,初始培养基往往可以含有大量的葡萄糖,还会流加葡萄糖补料.但是常常在诱导前,让葡萄糖耗尽,再加IPTG诱导.如果用摇瓶培养的话,葡萄糖往往难以耗尽,诱导有些悬.对有些工程菌,即使在诱导阶段培养基中含有葡萄糖也可以顺利诱导.一句话,没有肯定的能或者不能,试验是靠自己动手做出来的.
亓威13461649938…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@笪怕5379：诱导时加半乳糖多少 能一起灭菌吗 -
亓威13461649938…… 不一起灭菌.培养基灭菌后加入微孔滤膜过滤除菌的IPTG,也可在菌液中加入IPTG.做大肠杆菌诱导时,加入至终浓度0.5mM~0.8mM.
@笪怕5379：诱导大肠杆菌表达时IPTG的量 -
亓威13461649938…… 50ug/ml,之前做过的
@笪怕5379：为什么在做原核表达SDS - PAGE时对照的还要做个加诱导剂的呢,那诱导剂加多少才好呢, -
亓威13461649938…… 因为你做的并不是纯化的蛋白电泳,而是菌体的总蛋白,如果不作对照的话,就不能说明哪个条带是你的目的基因的特异表达. 如果做目的基因不加诱导剂的对照的话,可以看出目的基因在不诱导下的本底表达水平.也可以看出诱导剂的作用. 我们实验室就是那么做的,有时候还会加空菌(宿主菌)的对照.
@笪怕5379：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
亓威13461649938…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@笪怕5379：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
亓威13461649938…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@笪怕5379：葡萄糖和乳糖细菌iptg怎么诱导 -
亓威13461649938…… IPTG不被菌体代谢,为乳糖类似物,一旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果,所以IPTG的诱导效率高,往往只需要很少量(1mmol/L)即可达到理想诱导效果.由于IPTG不被代谢,在胞内专一诱导外源蛋白的表达.不受细胞代谢的影响,诱导效果持续稳定.乳糖有双效作用,既能做为诱导剂异乳糖的前体物质,又可以做碳源,在诱导过程中,很不稳定,IPTG因其优异的稳定性决定了它适合做实验研究用.但是IPTG价格高,且有毒性,限制了其工业化大生产.
@笪怕5379：蛋白质表达一般的条件? -
亓威13461649938…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@笪怕5379：做低温诱导需要加iptg吗 - 作业帮
亓威13461649938…… [答案] 需要的 低温诱导可以降低IPTG的量,比如0.1mM IPTG,延长诱导时间,比如12~16小时. 不加IPTG的话只有极个别情况下会出现泄漏表达.一般都是不表达的.
@笪怕5379：高葡萄糖含量的培养基能IPTG诱导吗 -
亓威13461649938…… 要看是用什么方式培养,那个阶段诱导,工程菌的特性.例如,用发酵罐发酵诱导的话,初始培养基往往可以含有大量的葡萄糖,还会流加葡萄糖补料.但是常常在诱导前,让葡萄糖耗尽,再加IPTG诱导.如果用摇瓶培养的话,葡萄糖往往难以耗尽,诱导有些悬.对有些工程菌,即使在诱导阶段培养基中含有葡萄糖也可以顺利诱导.一句话,没有肯定的能或者不能,试验是靠自己动手做出来的.
