iptg诱导表达8小时
@竺柴2849：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
于阅15125238951…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@竺柴2849：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
于阅15125238951…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@竺柴2849：蛋白质表达一般的条件? -
于阅15125238951…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@竺柴2849：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
于阅15125238951…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@竺柴2849：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
于阅15125238951…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@竺柴2849：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
于阅15125238951…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@竺柴2849：做低温诱导需要加iptg吗 - 作业帮
于阅15125238951…… [答案] 需要的 低温诱导可以降低IPTG的量,比如0.1mM IPTG,延长诱导时间,比如12~16小时. 不加IPTG的话只有极个别情况下会出现泄漏表达.一般都是不表达的.
@竺柴2849：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
于阅15125238951…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@竺柴2849：IPTG诱导大肠杆菌表达目标蛋白的作用原理是什么请用中文回答. - 作业帮
于阅15125238951…… [答案] 用乳糖操纵子作为启动子进行蛋白质表达的时候,需要诱导物进行诱导(相当于点火),但乳糖可以被细胞利用掉,所以利用IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)在结构上与乳糖的相似性也可以将基因表达启动,但它不能被细胞利用掉,从而实现持...
@竺柴2849：iptg诱导之前为什么要过夜揺菌并转接 - 作业帮
于阅15125238951…… [答案] 做大肠杆菌培养表达一般是之前的分子克隆工作都做完了,这时候从平板上挑出的单克隆的菌体会先接到一个比较小体积的培养基中,一般就是100ml左右.因为较多使用的LB培养基营养成分比较少,所以需要过夜摇瓶让菌体生长到...
于阅15125238951…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@竺柴2849：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
于阅15125238951…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@竺柴2849：蛋白质表达一般的条件? -
于阅15125238951…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@竺柴2849：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
于阅15125238951…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@竺柴2849：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
于阅15125238951…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@竺柴2849：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
于阅15125238951…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@竺柴2849：做低温诱导需要加iptg吗 - 作业帮
于阅15125238951…… [答案] 需要的 低温诱导可以降低IPTG的量,比如0.1mM IPTG,延长诱导时间,比如12~16小时. 不加IPTG的话只有极个别情况下会出现泄漏表达.一般都是不表达的.
@竺柴2849：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
于阅15125238951…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@竺柴2849：IPTG诱导大肠杆菌表达目标蛋白的作用原理是什么请用中文回答. - 作业帮
于阅15125238951…… [答案] 用乳糖操纵子作为启动子进行蛋白质表达的时候,需要诱导物进行诱导(相当于点火),但乳糖可以被细胞利用掉,所以利用IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)在结构上与乳糖的相似性也可以将基因表达启动,但它不能被细胞利用掉,从而实现持...
@竺柴2849：iptg诱导之前为什么要过夜揺菌并转接 - 作业帮
于阅15125238951…… [答案] 做大肠杆菌培养表达一般是之前的分子克隆工作都做完了,这时候从平板上挑出的单克隆的菌体会先接到一个比较小体积的培养基中,一般就是100ml左右.因为较多使用的LB培养基营养成分比较少,所以需要过夜摇瓶让菌体生长到...
