iptg诱导剂什么时候加
@广柿753：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
雍些17359041320…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@广柿753：X - gal和IPTG,什么时候加到培养基里好 -
雍些17359041320…… 一般是配好的amp+LB板,涂板的时候把x-gal 40ul(20mg/ml),IPTG 4ul(200mg/ml)加入到菌液里,然后混匀涂板.也可以先涂到板上在涂菌. 配培养基的时候,一般不直接加x-gal,IPTG,确实存在浪费问题,因为菌只在平板表面长.
@广柿753：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
雍些17359041320…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@广柿753：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
雍些17359041320…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@广柿753：关于原核表达问题请问如果加入IPTG来诱导目的蛋白在大肠杆菌中表达,大概是在什么时候收集细菌呢?是不是需要达到什么条件了,才能收集,比如OD... - 作业帮
雍些17359041320…… [答案] 菌浓度OD=0.6-1.0开始诱导,你可以在2h,4h,8h的时候取个样,跑一个PAGE胶考马斯染色看看总的目的蛋白浓度,每个蛋白表达速度不同,需要的时间不一样,一般4h就可以了,最好还要做一次超声破碎或者酶解,离心分离以后沉淀和...
@广柿753：谁能给我解释一下什么叫冷诱导,要怎么做? -
雍些17359041320…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导.可以尝试25C,20C,我们以前实验室还尝试过18C和16C,只是这样培养时间就需要比较长,需要过夜.
@广柿753：做低温诱导需要加iptg吗 - 作业帮
雍些17359041320…… [答案] 需要的 低温诱导可以降低IPTG的量,比如0.1mM IPTG,延长诱导时间,比如12~16小时. 不加IPTG的话只有极个别情况下会出现泄漏表达.一般都是不表达的.
@广柿753：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
雍些17359041320…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@广柿753：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
雍些17359041320…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@广柿753：蛋白质表达一般的条件? -
雍些17359041320…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
雍些17359041320…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@广柿753：X - gal和IPTG,什么时候加到培养基里好 -
雍些17359041320…… 一般是配好的amp+LB板,涂板的时候把x-gal 40ul(20mg/ml),IPTG 4ul(200mg/ml)加入到菌液里,然后混匀涂板.也可以先涂到板上在涂菌. 配培养基的时候,一般不直接加x-gal,IPTG,确实存在浪费问题,因为菌只在平板表面长.
@广柿753：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
雍些17359041320…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@广柿753：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
雍些17359041320…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@广柿753：关于原核表达问题请问如果加入IPTG来诱导目的蛋白在大肠杆菌中表达,大概是在什么时候收集细菌呢?是不是需要达到什么条件了,才能收集,比如OD... - 作业帮
雍些17359041320…… [答案] 菌浓度OD=0.6-1.0开始诱导,你可以在2h,4h,8h的时候取个样,跑一个PAGE胶考马斯染色看看总的目的蛋白浓度,每个蛋白表达速度不同,需要的时间不一样,一般4h就可以了,最好还要做一次超声破碎或者酶解,离心分离以后沉淀和...
@广柿753：谁能给我解释一下什么叫冷诱导,要怎么做? -
雍些17359041320…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导.可以尝试25C,20C,我们以前实验室还尝试过18C和16C,只是这样培养时间就需要比较长,需要过夜.
@广柿753：做低温诱导需要加iptg吗 - 作业帮
雍些17359041320…… [答案] 需要的 低温诱导可以降低IPTG的量,比如0.1mM IPTG,延长诱导时间,比如12~16小时. 不加IPTG的话只有极个别情况下会出现泄漏表达.一般都是不表达的.
@广柿753：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
雍些17359041320…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@广柿753：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
雍些17359041320…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@广柿753：蛋白质表达一般的条件? -
雍些17359041320…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
