iptg诱导浓度怎么计算
@酆空1511：现有1M IPTG,加到5ml培养基中,使终浓度为1mmol/L ,加多少?怎么算的?谢谢.不要讲述,要公式计算 -
师邦19130591880…… 加0.005ml. 公式:1M*0.005ml/5ml=1mmol/L
@酆空1511：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
师邦19130591880…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@酆空1511：24mg/ml IPTG怎样配成1mM浓度丁香园 -
师邦19130591880…… 要将24mg/ml IPTG配成1mM浓度,可以按照以下步骤进行:1. 确定需要配制的iptg溶液体积,假设为100毫升.2. 计算需要多少克iptg,即100毫升*10*0.001*24mg,得出结果为0.0000024克.3. 将这么多iptg溶于10毫升无水乙醇中,然后定容到10毫升.这样,就可以将24mg/ml IPTG配成1mM浓度.
@酆空1511：诱导大肠杆菌表达时IPTG的量 -
师邦19130591880…… 50ug/ml,之前做过的
@酆空1511：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
师邦19130591880…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@酆空1511：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
师邦19130591880…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@酆空1511：蛋白质表达一般的条件? -
师邦19130591880…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@酆空1511：怎样算某蛋白的在重组菌中的表达量? -
师邦19130591880…… 做个IPTG诱导前后的对比,跑SDS PAGE胶.用同等OD同等体积的菌液收集细胞裂解做样品,染色后看条带浓度,然后做一系列浓度梯度.旁边跑一个已知浓度的蛋白,比如BSA.这样可以确定在哪一个数量级.或者可以再跑一块胶,不染色,把对应位置的给切下来,液氮冻完磨碎重新溶解,去测浓度. 希望采纳
@酆空1511：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
师邦19130591880…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@酆空1511：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
师邦19130591880…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
师邦19130591880…… 加0.005ml. 公式:1M*0.005ml/5ml=1mmol/L
@酆空1511：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
师邦19130591880…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@酆空1511：24mg/ml IPTG怎样配成1mM浓度丁香园 -
师邦19130591880…… 要将24mg/ml IPTG配成1mM浓度,可以按照以下步骤进行:1. 确定需要配制的iptg溶液体积,假设为100毫升.2. 计算需要多少克iptg,即100毫升*10*0.001*24mg,得出结果为0.0000024克.3. 将这么多iptg溶于10毫升无水乙醇中,然后定容到10毫升.这样,就可以将24mg/ml IPTG配成1mM浓度.
@酆空1511：诱导大肠杆菌表达时IPTG的量 -
师邦19130591880…… 50ug/ml,之前做过的
@酆空1511：pgex - 6p - 1怎样用iptg诱导 -
师邦19130591880…… 一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻.
@酆空1511：请教:IPTG的诱导原理是什么 -
师邦19130591880…… 如果是做蛋白表达的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入IPTG进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达.但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
@酆空1511：蛋白质表达一般的条件? -
师邦19130591880…… 一般影响表达的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),IPTG浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L.转速需要自己摸索,不要高于200r/min.不同的载体和基因都不同.并没有完全适用的万能条件.
@酆空1511：怎样算某蛋白的在重组菌中的表达量? -
师邦19130591880…… 做个IPTG诱导前后的对比,跑SDS PAGE胶.用同等OD同等体积的菌液收集细胞裂解做样品,染色后看条带浓度,然后做一系列浓度梯度.旁边跑一个已知浓度的蛋白,比如BSA.这样可以确定在哪一个数量级.或者可以再跑一块胶,不染色,把对应位置的给切下来,液氮冻完磨碎重新溶解,去测浓度. 希望采纳
@酆空1511：低温诱导蛋白表达时用多少度合适 -
师邦19130591880…… IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导, 不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点,做个一定范围的探索.
@酆空1511：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
师邦19130591880…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
