pm2511蛋白marker
@蔡居4499：什么叫 预染蛋白marker -
农晏17270378866…… 非预染蛋白marker和预染蛋白marker有很多区别不过其中最重要和明显的区别就是非预染蛋白marker跑完胶之后一定要染色脱色才能在胶上看见预染蛋白marker跑完胶之后不需要染色脱色直接就可以在胶上看见 至于其他都是些细节上的区别,比如有些预染蛋白marker会做成彩虹色的,以便区别分子量大小有些预染蛋白marker的条带比较多等等
@蔡居4499：什么叫 预染蛋白marker
农晏17270378866…… 预染蛋白marker为一些纯化好的蛋白的混合物.这些蛋白混合物与一种蓝色染料共价偶联.可在凝胶电泳时出现强度均匀的8条带.同未预染的蛋白marker相比,预染蛋白marker因与染料共价偶联而在SDS-PAGE电泳时的迁移特性发生某些改变.
@蔡居4499：蛋白marker需要加loading buffer吗
农晏17270378866…… 现在用预染MAKER,不用加loading buffer的,也不用变性! 未预染marker需要加loading buffer. loading buffer的功能主要有两个.第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯氰FF起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔.另外,有的Buffer是加有SDS的,一般都会写明.SDS主要是促使聚合酶变性,因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率.细胞裂解后的裂解液,加loading 100℃加热,也是为了中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解.
@蔡居4499：非预染蛋白MAKER和预染蛋白MARKER有什么区别 -
农晏17270378866…… 简单讲,就是非预染蛋白MAKER电泳时看不到条带,染色后才能看到,而预染蛋白MARKER会有特定的某些蛋白条带带有颜色,电泳过程中可以观察到,还有在WB过程中也起到转膜是否成功的指示作用
@蔡居4499：哪种预染低分子量蛋白Marker好 -
农晏17270378866…… 合适的就好.一般看Marker条带是否清晰锐利,是否均匀,纯化不够的Marker会成“团”而不利于判断大小.厚百holdbio上的彩色预染超低分子蛋白质分子量标准(AR1117),表观分子量范围1.7 - 40 kDa,颜色锐利稳定,不妨看看(百度一下holdbio).
@蔡居4499：做蛋白质免疫印迹时一抗和marker怎么选择? -
农晏17270378866…… 一抗要针对你的目的蛋白选择特异性很强的相应抗体就可以了的,一般选择抗体说明书上说专门针对WB使用的抗体,而且一般应选择效价较高的抗体. 而MARKER则要取决于你的目的蛋白的分子大小了,选择相应的marker,marker最好要能比较容易的区分条带是否为目的蛋白,即在目的蛋白这一分子大小附近最好是能区分度较大,相应的分子大小的梯度要便于区分.
@蔡居4499：怎样计算电泳中蛋白分子量 -
农晏17270378866…… 1.首先要选择一款未经过染色的蛋白Marker,和你所要确定分子量大小的蛋白一起电泳. 2.在电泳过程中尽量选择靠中间的泳道,避免边缘效应引起条带歪斜,没有样的孔用loading填满. 3.电泳结束后,考马斯亮蓝染色. 4.如果有凝胶成像系统,可以直接先拍照,然后用系统带的软件,根据Marker每一个条带的位置,分析目标蛋白分子量. 5.如果没有这种系统,就只能用土一点的办法,量每一个Marker条带相对于加样孔的迁移量,对应每个条带的分子量做标准曲线(excel可以),通过标准曲线得到的方程和目标蛋白的迁移率计算目标蛋白的分子量大小就可以了.
@蔡居4499：SDS - PAGE问题,预染蛋白marker电泳过程中消失什么原因 -
农晏17270378866…… 同工酶电泳一般是活性染色,marker没有相应酶的催化活性,当然染不上了.最简单就是用预染marker了,电泳时就能看到.
@蔡居4499：蛋白Marker使用有哪些常见问题 -
农晏17270378866…… ferment缉攻光纪叱慌癸苇含俩as的蛋白marker不错,有预染和非预染之分,预染marker的好处是电泳过程中就可以看到.现在被thermo收购了,你可以上官网查询你需要的marker. marker的大小还要根据你目的蛋白的大小,再选择相应的marker范围.
@蔡居4499：mark含什么蛋白质 -
农晏17270378866…… 常用的蛋白marker从117KD到17KD,不同的条带是由不同大小的蛋白组成的.一般pre-stained的marker有这样的组成 蛋白质 来源 分子量计算 MW (Da) MBP-b-牛乳糖1 E. coli 175,000 MBP-副肌球蛋白1 E. coli 83,000 谷氨酸脱氢酶 牛肝 62,000 醛缩酶 兔子肌肉 32,500 b-乳球蛋白 A 牛奶 25,000 溶解酵素 鸡蛋白 16,500 抑肽酶 牛肺 6,5001MBP = 麦芽糖结合蛋白, MBP-b-牛乳糖 = MBP 和b-牛乳糖的融合蛋白, MBP-副肌球蛋白 = MBP 和副肌球蛋白的融合蛋白.
农晏17270378866…… 非预染蛋白marker和预染蛋白marker有很多区别不过其中最重要和明显的区别就是非预染蛋白marker跑完胶之后一定要染色脱色才能在胶上看见预染蛋白marker跑完胶之后不需要染色脱色直接就可以在胶上看见 至于其他都是些细节上的区别,比如有些预染蛋白marker会做成彩虹色的,以便区别分子量大小有些预染蛋白marker的条带比较多等等
@蔡居4499：什么叫 预染蛋白marker
农晏17270378866…… 预染蛋白marker为一些纯化好的蛋白的混合物.这些蛋白混合物与一种蓝色染料共价偶联.可在凝胶电泳时出现强度均匀的8条带.同未预染的蛋白marker相比,预染蛋白marker因与染料共价偶联而在SDS-PAGE电泳时的迁移特性发生某些改变.
@蔡居4499：蛋白marker需要加loading buffer吗
农晏17270378866…… 现在用预染MAKER,不用加loading buffer的,也不用变性! 未预染marker需要加loading buffer. loading buffer的功能主要有两个.第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯氰FF起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔.另外,有的Buffer是加有SDS的,一般都会写明.SDS主要是促使聚合酶变性,因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率.细胞裂解后的裂解液,加loading 100℃加热,也是为了中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解.
@蔡居4499：非预染蛋白MAKER和预染蛋白MARKER有什么区别 -
农晏17270378866…… 简单讲,就是非预染蛋白MAKER电泳时看不到条带,染色后才能看到,而预染蛋白MARKER会有特定的某些蛋白条带带有颜色,电泳过程中可以观察到,还有在WB过程中也起到转膜是否成功的指示作用
@蔡居4499：哪种预染低分子量蛋白Marker好 -
农晏17270378866…… 合适的就好.一般看Marker条带是否清晰锐利,是否均匀,纯化不够的Marker会成“团”而不利于判断大小.厚百holdbio上的彩色预染超低分子蛋白质分子量标准(AR1117),表观分子量范围1.7 - 40 kDa,颜色锐利稳定,不妨看看(百度一下holdbio).
@蔡居4499：做蛋白质免疫印迹时一抗和marker怎么选择? -
农晏17270378866…… 一抗要针对你的目的蛋白选择特异性很强的相应抗体就可以了的,一般选择抗体说明书上说专门针对WB使用的抗体,而且一般应选择效价较高的抗体. 而MARKER则要取决于你的目的蛋白的分子大小了,选择相应的marker,marker最好要能比较容易的区分条带是否为目的蛋白,即在目的蛋白这一分子大小附近最好是能区分度较大,相应的分子大小的梯度要便于区分.
@蔡居4499：怎样计算电泳中蛋白分子量 -
农晏17270378866…… 1.首先要选择一款未经过染色的蛋白Marker,和你所要确定分子量大小的蛋白一起电泳. 2.在电泳过程中尽量选择靠中间的泳道,避免边缘效应引起条带歪斜,没有样的孔用loading填满. 3.电泳结束后,考马斯亮蓝染色. 4.如果有凝胶成像系统,可以直接先拍照,然后用系统带的软件,根据Marker每一个条带的位置,分析目标蛋白分子量. 5.如果没有这种系统,就只能用土一点的办法,量每一个Marker条带相对于加样孔的迁移量,对应每个条带的分子量做标准曲线(excel可以),通过标准曲线得到的方程和目标蛋白的迁移率计算目标蛋白的分子量大小就可以了.
@蔡居4499：SDS - PAGE问题,预染蛋白marker电泳过程中消失什么原因 -
农晏17270378866…… 同工酶电泳一般是活性染色,marker没有相应酶的催化活性,当然染不上了.最简单就是用预染marker了,电泳时就能看到.
@蔡居4499：蛋白Marker使用有哪些常见问题 -
农晏17270378866…… ferment缉攻光纪叱慌癸苇含俩as的蛋白marker不错,有预染和非预染之分,预染marker的好处是电泳过程中就可以看到.现在被thermo收购了,你可以上官网查询你需要的marker. marker的大小还要根据你目的蛋白的大小,再选择相应的marker范围.
@蔡居4499：mark含什么蛋白质 -
农晏17270378866…… 常用的蛋白marker从117KD到17KD,不同的条带是由不同大小的蛋白组成的.一般pre-stained的marker有这样的组成 蛋白质 来源 分子量计算 MW (Da) MBP-b-牛乳糖1 E. coli 175,000 MBP-副肌球蛋白1 E. coli 83,000 谷氨酸脱氢酶 牛肝 62,000 醛缩酶 兔子肌肉 32,500 b-乳球蛋白 A 牛奶 25,000 溶解酵素 鸡蛋白 16,500 抑肽酶 牛肺 6,5001MBP = 麦芽糖结合蛋白, MBP-b-牛乳糖 = MBP 和b-牛乳糖的融合蛋白, MBP-副肌球蛋白 = MBP 和副肌球蛋白的融合蛋白.
