ripqpcr做内参actin
@长虾6794：荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起吗 -
文柿13635515719…… 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin.或者18s rRNA也可以.如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致.如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题.测到的目的基因的表达量就不可靠了
@长虾6794：荧光定量pcr标准曲线中的扩增效率太高怎么办 -
文柿13635515719…… 1、调整下体系,不要自己配置反应液,最好用商品的MIX,这样各个组分都是最佳的配比. 2、三步法改为两步法,退火延伸设置为一步,大部分的温度为60度,这个只是建议,具体看你买的试剂的说明书,会有具体的说明. 3、很有可能有非特异性扩增,自己排查下反应体系,根据溶解曲线是否单峰,扩增曲线CT值综合分析.
@长虾6794：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
文柿13635515719…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@长虾6794：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
文柿13635515719…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@长虾6794：mirna的荧光定量pcr可以用actin做内参吗 -
文柿13635515719…… mirna的荧光定量pcr可以用actin做内参 miRNA通过与转录本的相互作用,关闭或抑制基因的表达. 最近的研究表明它们影响了约三成的基因. miRNA在多个组织中差异表达,这就让表达图谱分析成为研究的重点. 同时,miRNA的过表达和抑...
@长虾6794：我做RT - PCR要用Marker和β - actin吗? -
文柿13635515719…… 需要Maker的,不然你不知道你扩出来的条带是不是你需要的.另外内参(actin 是在生物发育的每个阶段都会表达,应该就是一个管家基因靶,所以可以拿出来当内参的)也是需要的,这样可以对你跑出来的目的基因和内参做一下比较,做一下半定量.
@长虾6794：【求助】为什么做PCR要做β -
文柿13635515719…… β-actin是什么意思?为什么叫β-actin内参?在做PCR或者荧光定量PCR时为什么要做β-actin内参对照?如果没有做内参结果就不可靠吗?即使跑胶的效果很好.谢谢各位师兄师姐的指教β-actin即β肌动蛋白,是actin家族的一员,在维持细胞结构,细胞内运动,细胞分裂等细胞生理活动方面发挥着重要的作用,它是管家基因中的一种.管家基因 (house-keeping genes):是指所有细胞中均要. 表达的一类基因,其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的.例如β-actin、GAPDH等.在进行半定量PCR时,选择管家基因可以通过计算目的基因和内参的比值,得到基因表达的相对浓度.
@长虾6794：miRNA荧光定量PCR结果怎么看 -
文柿13635515719…… 荧光定量我用罗氏的反应速度算是相当快的,在样本处理(提出核酸)后,放在荧光定量PCR仪器上一般需要30分钟~1小时左右.但是如果你的样本比如支原体的含量非常高,可能在没有运行结束已经可以看出结果了,但是如果说5分钟就出结果了,确实太快了点.如果是realtime做表达量,用excel的制图,将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了.如果你还做了标曲的话,就用制图中的散点图看R2值. 其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对. 具体情况具体分析.
@长虾6794：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因 -
文柿13635515719…… 内参就是在cDNA里面的啊 比如你有三种反转录的cDNA 就分别用内参的引物做三组 和目标基因一起做就行了 不过是要单独加 不是和目标基因的引物加在一个孔里
@长虾6794：实时荧光定量pcr之前要不要做个内参基因的筛选 -
文柿13635515719…… 通常不需要,因为我们已经很清楚每个内参的属性.但还需要看你用定量做什么,比如说做组织表达,或者诱导表达,我们都会偏好于不同的内参.
文柿13635515719…… 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin.或者18s rRNA也可以.如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致.如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题.测到的目的基因的表达量就不可靠了
@长虾6794：荧光定量pcr标准曲线中的扩增效率太高怎么办 -
文柿13635515719…… 1、调整下体系,不要自己配置反应液,最好用商品的MIX,这样各个组分都是最佳的配比. 2、三步法改为两步法,退火延伸设置为一步,大部分的温度为60度,这个只是建议,具体看你买的试剂的说明书,会有具体的说明. 3、很有可能有非特异性扩增,自己排查下反应体系,根据溶解曲线是否单峰,扩增曲线CT值综合分析.
@长虾6794：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
文柿13635515719…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@长虾6794：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
文柿13635515719…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@长虾6794：mirna的荧光定量pcr可以用actin做内参吗 -
文柿13635515719…… mirna的荧光定量pcr可以用actin做内参 miRNA通过与转录本的相互作用,关闭或抑制基因的表达. 最近的研究表明它们影响了约三成的基因. miRNA在多个组织中差异表达,这就让表达图谱分析成为研究的重点. 同时,miRNA的过表达和抑...
@长虾6794：我做RT - PCR要用Marker和β - actin吗? -
文柿13635515719…… 需要Maker的,不然你不知道你扩出来的条带是不是你需要的.另外内参(actin 是在生物发育的每个阶段都会表达,应该就是一个管家基因靶,所以可以拿出来当内参的)也是需要的,这样可以对你跑出来的目的基因和内参做一下比较,做一下半定量.
@长虾6794：【求助】为什么做PCR要做β -
文柿13635515719…… β-actin是什么意思?为什么叫β-actin内参?在做PCR或者荧光定量PCR时为什么要做β-actin内参对照?如果没有做内参结果就不可靠吗?即使跑胶的效果很好.谢谢各位师兄师姐的指教β-actin即β肌动蛋白,是actin家族的一员,在维持细胞结构,细胞内运动,细胞分裂等细胞生理活动方面发挥着重要的作用,它是管家基因中的一种.管家基因 (house-keeping genes):是指所有细胞中均要. 表达的一类基因,其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的.例如β-actin、GAPDH等.在进行半定量PCR时,选择管家基因可以通过计算目的基因和内参的比值,得到基因表达的相对浓度.
@长虾6794：miRNA荧光定量PCR结果怎么看 -
文柿13635515719…… 荧光定量我用罗氏的反应速度算是相当快的,在样本处理(提出核酸)后,放在荧光定量PCR仪器上一般需要30分钟~1小时左右.但是如果你的样本比如支原体的含量非常高,可能在没有运行结束已经可以看出结果了,但是如果说5分钟就出结果了,确实太快了点.如果是realtime做表达量,用excel的制图,将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了.如果你还做了标曲的话,就用制图中的散点图看R2值. 其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对. 具体情况具体分析.
@长虾6794：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因 -
文柿13635515719…… 内参就是在cDNA里面的啊 比如你有三种反转录的cDNA 就分别用内参的引物做三组 和目标基因一起做就行了 不过是要单独加 不是和目标基因的引物加在一个孔里
@长虾6794：实时荧光定量pcr之前要不要做个内参基因的筛选 -
文柿13635515719…… 通常不需要,因为我们已经很清楚每个内参的属性.但还需要看你用定量做什么,比如说做组织表达,或者诱导表达,我们都会偏好于不同的内参.
