qpcr内参actin值一般多少
@梅易1229：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
田子13975264021…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@梅易1229：荧光定量PCR beta actin的Ct一般是多少 -
田子13975264021…… 这个要根据你的总RNA浓度 一般来说,1μg/μl的总RNA 20循环以内就到Ct了 但是不同的组织样本actin的浓度不一致的 我做过肌肉、内脏、脑组织的,差异会比较大
@梅易1229：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
田子13975264021…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@梅易1229：实时荧光定量PCR的结果该怎样分析? -
田子13975264021…… 如果有标准曲线,按照标准曲线计算. 一般都是相对量.则用delta delta CT方法来计算.举例如下: 对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15.实验组基因A CT值18,内参CT值14. 首先算加样量:delta CT=15-14=1.2的1次方...
@梅易1229：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
田子13975264021…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
@梅易1229：怎样检测actin基因在不同组织的表达量高低 -
田子13975264021…… actin一般作为内参使用,意味着它的表达水平在多数细胞中是比较一致的.如果需要比较actin的话,就需要使用其他的内参了,比如GAPDH. 具体选择什么基因作为内参,就和你选取的组织有关,最好查阅一下文献,然后多选择几个内参比较一下.
@梅易1229：做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? -
田子13975264021…… 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
@梅易1229：PCR反应体系中的Actin是什么 -
田子13975264021…… 定量或半定量PCR中内参的一种,全称是β-Actin
@梅易1229：康为世纪的Actin内参怎么样?有人用过么?
田子13975264021…… 可以啊,β-actin是一种持家蛋白,当然可以用作qPCR内参. 以上是对这个问题的回答,希望对您有帮助.
@梅易1229：普通pcr要跑actin吗? -
田子13975264021…… 如果不做半定量,就不需要内参actin.
田子13975264021…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@梅易1229：荧光定量PCR beta actin的Ct一般是多少 -
田子13975264021…… 这个要根据你的总RNA浓度 一般来说,1μg/μl的总RNA 20循环以内就到Ct了 但是不同的组织样本actin的浓度不一致的 我做过肌肉、内脏、脑组织的,差异会比较大
@梅易1229：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
田子13975264021…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@梅易1229：实时荧光定量PCR的结果该怎样分析? -
田子13975264021…… 如果有标准曲线,按照标准曲线计算. 一般都是相对量.则用delta delta CT方法来计算.举例如下: 对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15.实验组基因A CT值18,内参CT值14. 首先算加样量:delta CT=15-14=1.2的1次方...
@梅易1229：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
田子13975264021…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
@梅易1229：怎样检测actin基因在不同组织的表达量高低 -
田子13975264021…… actin一般作为内参使用,意味着它的表达水平在多数细胞中是比较一致的.如果需要比较actin的话,就需要使用其他的内参了,比如GAPDH. 具体选择什么基因作为内参,就和你选取的组织有关,最好查阅一下文献,然后多选择几个内参比较一下.
@梅易1229：做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? -
田子13975264021…… 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
@梅易1229：PCR反应体系中的Actin是什么 -
田子13975264021…… 定量或半定量PCR中内参的一种,全称是β-Actin
@梅易1229：康为世纪的Actin内参怎么样?有人用过么?
田子13975264021…… 可以啊,β-actin是一种持家蛋白,当然可以用作qPCR内参. 以上是对这个问题的回答,希望对您有帮助.
@梅易1229：普通pcr要跑actin吗? -
田子13975264021…… 如果不做半定量,就不需要内参actin.
