running+buffer稀释
@桓侍5625：running buffer 里的Glycine 和Tris Base是起什么作用? -
驷芝18038285228…… Glycine:甘氨酸 Tris Base:氨基甲烷 甘氨酸 甘氨酸(Glycine)又名氨基乙酸,为非人体必需氨基酸.甘氨酸是氨基酸系列中结构最为简单,人体非必需的一种氨基酸,在分子中同时具有酸性和碱性官能团,在水溶液中为强电解质,在强极...
@桓侍5625：做分子生物学实验时用来跑SDS - PAGE的10X running buffer 在配好之后需要高压灭菌吗? -
驷芝18038285228…… 不用灭菌啊,使用的时候又不是无菌操作,就不用灭菌. 还有啊,这个Tris-Glycine Buffer 一般不是配成5*的吗
@桓侍5625：western blot 转移缓冲液的配方? -
驷芝18038285228…… 转移缓冲液中不能含有sds的,sds会严重影响转印效果.
@桓侍5625：在western blot中loading buffer的作用是什么? -
驷芝18038285228…… 1、指示剂,方便观察电泳进行的程度;2、密度大,携带你的样本沉到孔的底部;3、保持蛋白线性及携带过量负电荷的状态.除此之外,里面最重要的是还有巯基乙醇还原剂来让...
@桓侍5625：running buffer的浓度弄错了会影响western结果么 -
驷芝18038285228…… running buffer 电泳缓冲液 [网络短语] running buffer 电泳缓冲液,运行缓冲液,电泳液
@桓侍5625：western用的running buffer稀释成后ph会改变吗 -
驷芝18038285228…… western用的running buffer稀释成后ph会改变 western blot膜再生strip的原理都不太相同但是目的都只有一个,就是使膜上的抗原抗体复合物分开有些stripping buffer配方中含有SDS,在低ph值或适当的温度下,可以使膜上的大多数抗原抗体复合物分开.这样可以回收再利用膜.甘氨酸作为氨基酸,是两性分子,在不同pH情况下解离程度不同.这样由于浓缩胶和分离胶的pH的差别,导致在两者中甘氨酸根含量不同,形成不同强度的电场,从而达到浓缩/分离的目的.Tris-HCL是缓冲体系,主要用于维持pH稳定.
@桓侍5625：蛋白电泳为什么 tris glycine -
驷芝18038285228…… Tris-Glycine,Tris-Tricine,Tris-硼酸盐都可以作为蛋白电泳的缓冲体系. 只要是可以稳定被检测样品的pH,并且不会和SDS反应或者发生相互作用的缓冲液都可以使用. Tris-甘氨酸最常用,Tris-Tricine主要用在小分子蛋白(小肽)电泳中,Tris-硼酸盐一般用在糖蛋白电泳检测中.
@桓侍5625：变性聚丙烯酰胺凝胶电泳点样怎么往上飘 -
驷芝18038285228…… 分离核酸的胶是琼脂糖胶吧?SDS-PAGE胶不是用来分离蛋白质的吗?6*loading buffer 5ul,PCR产物10ul,那loading buffer加个2微升不就行了?还有液体密度,SDS-PAGE胶是浸没在SDS溶液中的,琼脂糖胶是浸没在TAE中的,密度不一样当然会出问题,你再搞搞清楚?
@桓侍5625：分子量为6kd的蛋白质怎样做wb -
驷芝18038285228…… 建议用tris-acetate gel+tris-tricine running buffer,这个系统很适合做大分子蛋白的western blot.电泳时间要很长,2个小时?转膜时间也要长点 下面这个是胶的浓度范围 蛋白质分子量范围 适用的凝胶浓度(%)1-4*10`4 15-204*104-1*10`5 10-151-5*10`5 5-10>5*10`5 2-5
@桓侍5625：我要检测的蛋白是100KD,配置了8%的分离胶,该用多大的电压来跑分离胶?我用了120V,但是不到一个小时就跑完了,时间短对目的蛋白的分离有没有影... - 作业帮
驷芝18038285228…… [答案] Western Blotting Protocol 1.细胞裂解 只用于western的细胞可以直接用1%SDS/PBS裂解,要用于IP,co-ip之类的实验的蛋白... 将胶小心从板上拿下来,置于transfer buffer 中(1*transfer buffer中加入20%甲醇)洗掉running buffer,15min. 2)将NC膜置...
驷芝18038285228…… Glycine:甘氨酸 Tris Base:氨基甲烷 甘氨酸 甘氨酸(Glycine)又名氨基乙酸,为非人体必需氨基酸.甘氨酸是氨基酸系列中结构最为简单,人体非必需的一种氨基酸,在分子中同时具有酸性和碱性官能团,在水溶液中为强电解质,在强极...
@桓侍5625：做分子生物学实验时用来跑SDS - PAGE的10X running buffer 在配好之后需要高压灭菌吗? -
驷芝18038285228…… 不用灭菌啊,使用的时候又不是无菌操作,就不用灭菌. 还有啊,这个Tris-Glycine Buffer 一般不是配成5*的吗
@桓侍5625：western blot 转移缓冲液的配方? -
驷芝18038285228…… 转移缓冲液中不能含有sds的,sds会严重影响转印效果.
@桓侍5625：在western blot中loading buffer的作用是什么? -
驷芝18038285228…… 1、指示剂,方便观察电泳进行的程度;2、密度大,携带你的样本沉到孔的底部;3、保持蛋白线性及携带过量负电荷的状态.除此之外,里面最重要的是还有巯基乙醇还原剂来让...
@桓侍5625：running buffer的浓度弄错了会影响western结果么 -
驷芝18038285228…… running buffer 电泳缓冲液 [网络短语] running buffer 电泳缓冲液,运行缓冲液,电泳液
@桓侍5625：western用的running buffer稀释成后ph会改变吗 -
驷芝18038285228…… western用的running buffer稀释成后ph会改变 western blot膜再生strip的原理都不太相同但是目的都只有一个,就是使膜上的抗原抗体复合物分开有些stripping buffer配方中含有SDS,在低ph值或适当的温度下,可以使膜上的大多数抗原抗体复合物分开.这样可以回收再利用膜.甘氨酸作为氨基酸,是两性分子,在不同pH情况下解离程度不同.这样由于浓缩胶和分离胶的pH的差别,导致在两者中甘氨酸根含量不同,形成不同强度的电场,从而达到浓缩/分离的目的.Tris-HCL是缓冲体系,主要用于维持pH稳定.
@桓侍5625：蛋白电泳为什么 tris glycine -
驷芝18038285228…… Tris-Glycine,Tris-Tricine,Tris-硼酸盐都可以作为蛋白电泳的缓冲体系. 只要是可以稳定被检测样品的pH,并且不会和SDS反应或者发生相互作用的缓冲液都可以使用. Tris-甘氨酸最常用,Tris-Tricine主要用在小分子蛋白(小肽)电泳中,Tris-硼酸盐一般用在糖蛋白电泳检测中.
@桓侍5625：变性聚丙烯酰胺凝胶电泳点样怎么往上飘 -
驷芝18038285228…… 分离核酸的胶是琼脂糖胶吧?SDS-PAGE胶不是用来分离蛋白质的吗?6*loading buffer 5ul,PCR产物10ul,那loading buffer加个2微升不就行了?还有液体密度,SDS-PAGE胶是浸没在SDS溶液中的,琼脂糖胶是浸没在TAE中的,密度不一样当然会出问题,你再搞搞清楚?
@桓侍5625：分子量为6kd的蛋白质怎样做wb -
驷芝18038285228…… 建议用tris-acetate gel+tris-tricine running buffer,这个系统很适合做大分子蛋白的western blot.电泳时间要很长,2个小时?转膜时间也要长点 下面这个是胶的浓度范围 蛋白质分子量范围 适用的凝胶浓度(%)1-4*10`4 15-204*104-1*10`5 10-151-5*10`5 5-10>5*10`5 2-5
@桓侍5625：我要检测的蛋白是100KD,配置了8%的分离胶,该用多大的电压来跑分离胶?我用了120V,但是不到一个小时就跑完了,时间短对目的蛋白的分离有没有影... - 作业帮
驷芝18038285228…… [答案] Western Blotting Protocol 1.细胞裂解 只用于western的细胞可以直接用1%SDS/PBS裂解,要用于IP,co-ip之类的实验的蛋白... 将胶小心从板上拿下来,置于transfer buffer 中(1*transfer buffer中加入20%甲醇)洗掉running buffer,15min. 2)将NC膜置...
