takara+rr820a
@南怨394：有人用takara的消除gDNA的反转录试剂盒吗 -
娄忠13428305207…… 对于新手来说购买反转录试剂盒是比较理想的,买一个kit看看说明书操作就可以了.推荐两款kit TAKARA和HaiGene,这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除,因此对RNA质量的要求不高.TAKARA的RR047A操作方便,反转录温度...
@南怨394：用takara的试剂盒提取大米和大豆的基因组,pcr之后跑电泳,但是电泳总是没结果,没条带.试剂盒应该没有问题,因为不久前还用,都提出来了.而且因为... - 作业帮
娄忠13428305207…… [答案] PRC跑不出来先考虑是不是模板的问题,是不是DNA没有抽出来,可以把抽出来的东西跑个胶看一看.如果抽出来了,但是PCR没跑出来,就把模板浓度降低一下;如果DNA没跑出来,就要从抽提步骤上找问题.你们用的试剂盒是洗脱柱类...
@南怨394：有哪位虫友用过TaKaRa的QuickCut限制酶 -
娄忠13428305207…… 如果你的目的基因没有这两个酶切位点,那么就是你选错酶切位点了,SacI与BamHI都在你插入片段的同一边,用这两个酶酶切只相当于切了一个口,怎么酶切都是单一条带.
@南怨394：高保真酶的PCR结果
娄忠13428305207…… EX-TAQ很容易出现杂带的,这个酶本身的BUFFER是高离子浓度.你可以试试用EXTAQ酶扩出条带后,在琼脂糖胶上切下纯化在用高保真酶扩一下,扩出来就是有产物扩不出就是非特异扩增
@南怨394：有人用过Takara的RT - PCR试剂盒吗 -
娄忠13428305207…… Takara的RT-PCR试剂盒 还是不错的,毕竟是进口的试剂盒,质量过关,但是目前来说做PCR的一般都选择实验外包,费用还便宜,直接取决于样本数量收费,实验数据满意再付费
@南怨394：takara rr037a反转录试剂盒反转录出来的是单链cDNA还是双链cDNA? -
娄忠13428305207…… 是单链cDNA,想合成双链cDNA需要另外操作: 一、cDNA第二链的合成: 1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物-20℃冰箱中保存,待电泳检测.其余的产物合并,混匀,然后顺序加入下列试剂(promega): 20ul 10*DNA Polymerase I buffer ...
@南怨394：高保真酶,PCR末端加A原理 -
娄忠13428305207…… 我觉得,有可能是含有普通taq酶的. 3'-5'外切活性是产生高保真性的保证.35外切可以纠错,切除错配碱基保证pcr的高保证性.但是这样也使得一些引物也降解了,为了保证扩增效率,加一些普通taq酶是可以的!
@南怨394：takara测序发给我的结果,包含三个文件,除了两个双向测序的结果以外,还有一个特别短的是什么? -
娄忠13428305207…… 最准确的方法,你可以将测序结果放到相关的软件Sequencher里面分析,比对就OK啦. 不过通过你的表述,我个人觉得PCR产物较长或者克隆片段较长的可能性比较大,一个反应测不通,就会采用双向测序的方法,即两头测.由于测序反应一次读取的长度有限,有可能两头测也没有测通,然后你说的测序公司会根据已经得到的测序结果再次设计引物,进行测序,最后测通.两头的测序结果就可能是P1和P2,那么剩余中间的测序结果为R1. 说的不一定对,最好还是和测序公司联系一下吧.
@南怨394：如何抽提RNA?
娄忠13428305207…… 取组织经称量后转移到用液氮预冷的研钵中,迅速研磨组织直至粉末状,然后向研钵中加入1mL的RNAiso Plus (Takara,中国大连),按照说明书抽提总RNA.
娄忠13428305207…… 对于新手来说购买反转录试剂盒是比较理想的,买一个kit看看说明书操作就可以了.推荐两款kit TAKARA和HaiGene,这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除,因此对RNA质量的要求不高.TAKARA的RR047A操作方便,反转录温度...
@南怨394：用takara的试剂盒提取大米和大豆的基因组,pcr之后跑电泳,但是电泳总是没结果,没条带.试剂盒应该没有问题,因为不久前还用,都提出来了.而且因为... - 作业帮
娄忠13428305207…… [答案] PRC跑不出来先考虑是不是模板的问题,是不是DNA没有抽出来,可以把抽出来的东西跑个胶看一看.如果抽出来了,但是PCR没跑出来,就把模板浓度降低一下;如果DNA没跑出来,就要从抽提步骤上找问题.你们用的试剂盒是洗脱柱类...
@南怨394：有哪位虫友用过TaKaRa的QuickCut限制酶 -
娄忠13428305207…… 如果你的目的基因没有这两个酶切位点,那么就是你选错酶切位点了,SacI与BamHI都在你插入片段的同一边,用这两个酶酶切只相当于切了一个口,怎么酶切都是单一条带.
@南怨394：高保真酶的PCR结果
娄忠13428305207…… EX-TAQ很容易出现杂带的,这个酶本身的BUFFER是高离子浓度.你可以试试用EXTAQ酶扩出条带后,在琼脂糖胶上切下纯化在用高保真酶扩一下,扩出来就是有产物扩不出就是非特异扩增
@南怨394：有人用过Takara的RT - PCR试剂盒吗 -
娄忠13428305207…… Takara的RT-PCR试剂盒 还是不错的,毕竟是进口的试剂盒,质量过关,但是目前来说做PCR的一般都选择实验外包,费用还便宜,直接取决于样本数量收费,实验数据满意再付费
@南怨394：takara rr037a反转录试剂盒反转录出来的是单链cDNA还是双链cDNA? -
娄忠13428305207…… 是单链cDNA,想合成双链cDNA需要另外操作: 一、cDNA第二链的合成: 1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物-20℃冰箱中保存,待电泳检测.其余的产物合并,混匀,然后顺序加入下列试剂(promega): 20ul 10*DNA Polymerase I buffer ...
@南怨394：高保真酶,PCR末端加A原理 -
娄忠13428305207…… 我觉得,有可能是含有普通taq酶的. 3'-5'外切活性是产生高保真性的保证.35外切可以纠错,切除错配碱基保证pcr的高保证性.但是这样也使得一些引物也降解了,为了保证扩增效率,加一些普通taq酶是可以的!
@南怨394：takara测序发给我的结果,包含三个文件,除了两个双向测序的结果以外,还有一个特别短的是什么? -
娄忠13428305207…… 最准确的方法,你可以将测序结果放到相关的软件Sequencher里面分析,比对就OK啦. 不过通过你的表述,我个人觉得PCR产物较长或者克隆片段较长的可能性比较大,一个反应测不通,就会采用双向测序的方法,即两头测.由于测序反应一次读取的长度有限,有可能两头测也没有测通,然后你说的测序公司会根据已经得到的测序结果再次设计引物,进行测序,最后测通.两头的测序结果就可能是P1和P2,那么剩余中间的测序结果为R1. 说的不一定对,最好还是和测序公司联系一下吧.
@南怨394：如何抽提RNA?
娄忠13428305207…… 取组织经称量后转移到用液氮预冷的研钵中,迅速研磨组织直至粉末状,然后向研钵中加入1mL的RNAiso Plus (Takara,中国大连),按照说明书抽提总RNA.
