takara+premix+taq说明书
@汲竖3854：求助pcr技术试剂盒的选购问题 -
赵砍15033324703…… 一般试剂盒主要是针对酶分类,其次是分为简易操作混合体系和分开单独体系.先说酶,你的基因如果是小于2K,那么普通的高保真酶就可以满足,比如pfu,或者takara公司的ex taq.如果是长片段就选择各公司针对长片段设计的酶.如果不需要对序列保真度要求很高,只需要鉴定一下,那么普通的taq酶就够了.针对体系问题,如果你的基因有文献参考成熟的体系,那么一般就定混合体系那种premix的就可以,如果对Mg离子等有特殊要求,就选择分开自己配体系那种.至于PCR试剂盒的公司,最好的应该算是promega了,takara是平价里面很好的,看你预算了.
@汲竖3854：怎么看荧光定量PCR的试剂盒好不好 -
赵砍15033324703…… 如果你想做荧光定量PCR的根据实验思路来说应该需要一下试剂和仪器1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做.4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦.5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多.
@汲竖3854：有人用takara的消除gDNA的反转录试剂盒吗 -
赵砍15033324703…… 对于新手来说购买反转录试剂盒是比较理想的,买一个kit看看说明书操作就可以了.推荐两款kit TAKARA和HaiGene,这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除,因此对RNA质量的要求不高.TAKARA的RR047A操作方便,反转录温度...
@汲竖3854：求助关于microRNA的RT - PCR和qPCR试剂盒的问题 -
赵砍15033324703…… 不知道你引物设计好了没?如果引物已经有的话,试剂盒就容易解决.不过还要看你得实验目的:1.如果只是简单的把2500BP的片段扩增出来,普通的PCR polymerase就可以了,takara的60多元一支.2.但是普通的酶2500BP的有可能扩增不出...
@汲竖3854：Takara的NheI 和BamHI双酶切体系表中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓冲液呢? -
赵砍15033324703…… 1、如果你用的是Takara的酶,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧. 2、为什么不用NEB的酶呢?可以用buffer1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,效率更高,都可以在buffer4中达到100%的效率.以上,仅供参考~希望有帮助!
@汲竖3854：高保真酶,PCR末端加A原理 -
赵砍15033324703…… 我觉得,有可能是含有普通taq酶的. 3'-5'外切活性是产生高保真性的保证.35外切可以纠错,切除错配碱基保证pcr的高保证性.但是这样也使得一些引物也降解了,为了保证扩增效率,加一些普通taq酶是可以的!
@汲竖3854：takara测序发给我的结果,包含三个文件,除了两个双向测序的结果以外,还有一个特别短的是什么? -
赵砍15033324703…… 最准确的方法,你可以将测序结果放到相关的软件Sequencher里面分析,比对就OK啦. 不过通过你的表述,我个人觉得PCR产物较长或者克隆片段较长的可能性比较大,一个反应测不通,就会采用双向测序的方法,即两头测.由于测序反应一次读取的长度有限,有可能两头测也没有测通,然后你说的测序公司会根据已经得到的测序结果再次设计引物,进行测序,最后测通.两头的测序结果就可能是P1和P2,那么剩余中间的测序结果为R1. 说的不一定对,最好还是和测序公司联系一下吧.
@汲竖3854：Takara胶回收试剂盒 说明书,具体操作步骤 -
赵砍15033324703…… 1. 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段,任何类型或等级的琼脂糖都可以使用.我们强烈的建议您使用新鲜的TAE Buffer作为电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,因为会因其PH的升高而减少产量.新鲜的TBE也可以用,但只能得到较低的产量.2. 当所...
@汲竖3854：求takara la酶的正确使用方法.我做2800bp的片段,但是用la时出来,时没有,不知道体系到底如何? -
赵砍15033324703…… 25ul体系:LApremix 12.5ul cDNA 1ug 上下游引物 各0.5ul 水 补至25ul50ul体系以上各量均乘以2我p的也是2800左右的片段,重复性还不错
@汲竖3854：takara tomy foc tg是哪个系列?和mp系列比较哪个更好 -
赵砍15033324703…… Takara和Tomy是两家公司,在上个世纪合并了,在上个世纪末和孩之宝联手变形金刚.所以它不是一个系列,而且我可以告诉你,所谓mp美版,就是孩之宝,所谓mp日版,就是Takara Tomy.模具一样,涂装会有不同.foc是赛博坦的陨落系列,画风偏近g1,但是变形设计什么的根本比不上mp,差几条街.但是还是没有可比性啊,本来人物都不是一个系列,模型怎么比啊.至于tg,那是编号,日版的变形金刚都是有明确编号的,没记错的话是漫画idw变形金刚模型下的一个编号.
赵砍15033324703…… 一般试剂盒主要是针对酶分类,其次是分为简易操作混合体系和分开单独体系.先说酶,你的基因如果是小于2K,那么普通的高保真酶就可以满足,比如pfu,或者takara公司的ex taq.如果是长片段就选择各公司针对长片段设计的酶.如果不需要对序列保真度要求很高,只需要鉴定一下,那么普通的taq酶就够了.针对体系问题,如果你的基因有文献参考成熟的体系,那么一般就定混合体系那种premix的就可以,如果对Mg离子等有特殊要求,就选择分开自己配体系那种.至于PCR试剂盒的公司,最好的应该算是promega了,takara是平价里面很好的,看你预算了.
@汲竖3854：怎么看荧光定量PCR的试剂盒好不好 -
赵砍15033324703…… 如果你想做荧光定量PCR的根据实验思路来说应该需要一下试剂和仪器1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做.4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦.5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多.
@汲竖3854：有人用takara的消除gDNA的反转录试剂盒吗 -
赵砍15033324703…… 对于新手来说购买反转录试剂盒是比较理想的,买一个kit看看说明书操作就可以了.推荐两款kit TAKARA和HaiGene,这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除,因此对RNA质量的要求不高.TAKARA的RR047A操作方便,反转录温度...
@汲竖3854：求助关于microRNA的RT - PCR和qPCR试剂盒的问题 -
赵砍15033324703…… 不知道你引物设计好了没?如果引物已经有的话,试剂盒就容易解决.不过还要看你得实验目的:1.如果只是简单的把2500BP的片段扩增出来,普通的PCR polymerase就可以了,takara的60多元一支.2.但是普通的酶2500BP的有可能扩增不出...
@汲竖3854：Takara的NheI 和BamHI双酶切体系表中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓冲液呢? -
赵砍15033324703…… 1、如果你用的是Takara的酶,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧. 2、为什么不用NEB的酶呢?可以用buffer1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,效率更高,都可以在buffer4中达到100%的效率.以上,仅供参考~希望有帮助!
@汲竖3854：高保真酶,PCR末端加A原理 -
赵砍15033324703…… 我觉得,有可能是含有普通taq酶的. 3'-5'外切活性是产生高保真性的保证.35外切可以纠错,切除错配碱基保证pcr的高保证性.但是这样也使得一些引物也降解了,为了保证扩增效率,加一些普通taq酶是可以的!
@汲竖3854：takara测序发给我的结果,包含三个文件,除了两个双向测序的结果以外,还有一个特别短的是什么? -
赵砍15033324703…… 最准确的方法,你可以将测序结果放到相关的软件Sequencher里面分析,比对就OK啦. 不过通过你的表述,我个人觉得PCR产物较长或者克隆片段较长的可能性比较大,一个反应测不通,就会采用双向测序的方法,即两头测.由于测序反应一次读取的长度有限,有可能两头测也没有测通,然后你说的测序公司会根据已经得到的测序结果再次设计引物,进行测序,最后测通.两头的测序结果就可能是P1和P2,那么剩余中间的测序结果为R1. 说的不一定对,最好还是和测序公司联系一下吧.
@汲竖3854：Takara胶回收试剂盒 说明书,具体操作步骤 -
赵砍15033324703…… 1. 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段,任何类型或等级的琼脂糖都可以使用.我们强烈的建议您使用新鲜的TAE Buffer作为电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,因为会因其PH的升高而减少产量.新鲜的TBE也可以用,但只能得到较低的产量.2. 当所...
@汲竖3854：求takara la酶的正确使用方法.我做2800bp的片段,但是用la时出来,时没有,不知道体系到底如何? -
赵砍15033324703…… 25ul体系:LApremix 12.5ul cDNA 1ug 上下游引物 各0.5ul 水 补至25ul50ul体系以上各量均乘以2我p的也是2800左右的片段,重复性还不错
@汲竖3854：takara tomy foc tg是哪个系列?和mp系列比较哪个更好 -
赵砍15033324703…… Takara和Tomy是两家公司,在上个世纪合并了,在上个世纪末和孩之宝联手变形金刚.所以它不是一个系列,而且我可以告诉你,所谓mp美版,就是孩之宝,所谓mp日版,就是Takara Tomy.模具一样,涂装会有不同.foc是赛博坦的陨落系列,画风偏近g1,但是变形设计什么的根本比不上mp,差几条街.但是还是没有可比性啊,本来人物都不是一个系列,模型怎么比啊.至于tg,那是编号,日版的变形金刚都是有明确编号的,没记错的话是漫画idw变形金刚模型下的一个编号.
