western+blot二抗
@门询4516：western blot 为什么要用二抗?直接标记一抗不行吗? -
古胀18881352679…… 之所以用二抗,是因为二抗是带有酶标的抗体,它跟一抗结合之后可以曝光显影.如果你的一抗上面直接带有酶标物,那可以不用二抗直接曝光.但是一般你的一抗都是少数应用的,厂家不会大批量生产,就不会费劲给它加酶标.
@门询4516：western blot 二抗时间要多久啊? -
古胀18881352679…… 37度1h,二抗浓度不要过高,否则,背景颜色太深,还可能出现非特异条带.
@门询4516：ELISA里一抗和二抗的区别 -
古胀18881352679…… 二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体,在免疫学反应中,经常需要针对试验选择不同的二抗,艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品.检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,同时在后继试验中也...
@门询4516：western blot的一抗、二抗可以重复用么?一般可以用几次? -
古胀18881352679…… 保存得当的话,一抗工作液可重复利用2-3次一般不影响效果,但也不绝对,主要是看你的抗体本身如何,如果第一次做出来效果就不理想就不提倡这么做了.二抗还是算了吧!那么便宜,扔了不可惜.
@门询4516：western blot为什么要两次免疫反应 -
古胀18881352679…… 第一次免疫反应是为了让一抗结合目的蛋白,也可以说是让一抗特异性的识别出目的蛋白.达到检测的目的 第二次免疫反应时为了让二抗结合一抗,二抗上面有辣根过氧化物标记,结合一抗后就可以用ECL试剂反应,达到显影的效果 经过两次免疫反应后最终检测出目的蛋白
@门询4516：做western blot 的时候怎样选择抗体浓度? -
古胀18881352679…… 这个需要自己摸索,每个公司和每个蛋白都不一样,我的做法,先从1:500开始,如果在其他条件都没问题得情况下(比如上样量、二抗背景),如果荧光很强,你可以稀释,如果条带淡或者白板,那么你就得增加,比如1:100.一般CST1:500就可以了.Abcam的我用到1:100
@门询4516：western - blot实验中一抗和二抗的浓度对实验结果的影响? -
古胀18881352679…… 浓度太低肯定不行啊 一般一抗1:1000 没有条带 排除其他原因的话再提高浓度 二抗1:2000-5000都行 没有条带一般不会是二抗浓度的问题
@门询4516：western blot 步骤是什么? -
古胀18881352679…… 简单的说的话,可以大致分为8点:1. 收集蛋白样品2. 电泳3.转膜4.封闭5.一抗孵育 6.二抗孵育7.蛋白检测8.膜的重复利用,希望可以帮到你哦,你可以到网上找找啊
@门询4516：western blot的实验原理(详细的) -
古胀18881352679…… Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗. 经过PAGE分离的蛋白质样品(跑PAGE 胶的原理你懂吧~~~),转移到固相载体(硝酸纤维素膜NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变(这个过程就是转膜). 以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达.
古胀18881352679…… 之所以用二抗,是因为二抗是带有酶标的抗体,它跟一抗结合之后可以曝光显影.如果你的一抗上面直接带有酶标物,那可以不用二抗直接曝光.但是一般你的一抗都是少数应用的,厂家不会大批量生产,就不会费劲给它加酶标.
@门询4516：western blot 二抗时间要多久啊? -
古胀18881352679…… 37度1h,二抗浓度不要过高,否则,背景颜色太深,还可能出现非特异条带.
@门询4516：ELISA里一抗和二抗的区别 -
古胀18881352679…… 二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体,在免疫学反应中,经常需要针对试验选择不同的二抗,艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品.检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,同时在后继试验中也...
@门询4516：western blot的一抗、二抗可以重复用么?一般可以用几次? -
古胀18881352679…… 保存得当的话,一抗工作液可重复利用2-3次一般不影响效果,但也不绝对,主要是看你的抗体本身如何,如果第一次做出来效果就不理想就不提倡这么做了.二抗还是算了吧!那么便宜,扔了不可惜.
@门询4516：western blot为什么要两次免疫反应 -
古胀18881352679…… 第一次免疫反应是为了让一抗结合目的蛋白,也可以说是让一抗特异性的识别出目的蛋白.达到检测的目的 第二次免疫反应时为了让二抗结合一抗,二抗上面有辣根过氧化物标记,结合一抗后就可以用ECL试剂反应,达到显影的效果 经过两次免疫反应后最终检测出目的蛋白
@门询4516：做western blot 的时候怎样选择抗体浓度? -
古胀18881352679…… 这个需要自己摸索,每个公司和每个蛋白都不一样,我的做法,先从1:500开始,如果在其他条件都没问题得情况下(比如上样量、二抗背景),如果荧光很强,你可以稀释,如果条带淡或者白板,那么你就得增加,比如1:100.一般CST1:500就可以了.Abcam的我用到1:100
@门询4516：western - blot实验中一抗和二抗的浓度对实验结果的影响? -
古胀18881352679…… 浓度太低肯定不行啊 一般一抗1:1000 没有条带 排除其他原因的话再提高浓度 二抗1:2000-5000都行 没有条带一般不会是二抗浓度的问题
@门询4516：western blot 步骤是什么? -
古胀18881352679…… 简单的说的话,可以大致分为8点:1. 收集蛋白样品2. 电泳3.转膜4.封闭5.一抗孵育 6.二抗孵育7.蛋白检测8.膜的重复利用,希望可以帮到你哦,你可以到网上找找啊
@门询4516：western blot的实验原理(详细的) -
古胀18881352679…… Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗. 经过PAGE分离的蛋白质样品(跑PAGE 胶的原理你懂吧~~~),转移到固相载体(硝酸纤维素膜NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变(这个过程就是转膜). 以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达.
