western+blot步骤图示
@姓虎5272：western blot 具体操作步骤 - 作业帮
符界18374604612…… [答案] 什么是Westernblot? 最佳答案 Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测.对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测. 一、原理 与Southern或...
@姓虎5272：western blot 步骤是什么? -
符界18374604612…… 简单的说的话,可以大致分为8点:1. 收集蛋白样品2. 电泳3.转膜4.封闭5.一抗孵育 6.二抗孵育7.蛋白检测8.膜的重复利用,希望可以帮到你哦,你可以到网上找找啊
@姓虎5272：Western Blot转膜步骤谁能介绍一下? -
符界18374604612…… 1. 蛋白质抽提 实验对象为组织样品,取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白). 2. 蛋白质定量:按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度. 3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样,标准加进第一个孔中,电泳分离蛋白. 详细的Western Blot转膜步骤生物帮上面有详细介绍, http://product.bio1000.com/100078/ 抗体纯化产品
@姓虎5272：如何做western blot -
符界18374604612…… 用植物细胞做western blot 首先液氮保存叶片样品,用的时候研磨粉碎,再用蛋白提取液浸泡离心取上清 上清样品可以先去做定量检测 之后在样品中加上样缓冲液就可以进行western blot检测了
@姓虎5272：做western blot 实验,怎么煮蛋白 -
符界18374604612…… 根据样品形式的差异进行选择. 如果是研究纯化的蛋白,可以用100℃,煮5min就行; 如果是研究细胞样品的膜蛋白,可以用膜蛋白抽提试剂盒先做目的蛋白的富集,而后同上处理.
@姓虎5272：western blot实验怎么上样 -
符界18374604612…… 首先要设计上样的顺序,一般是让与抗体有反应的样品和没有反应的样品间隔开,这样条带之间反差比较明显.比如你的检测样能够与抗体反应,上样就是maker—阳性对照—阴性对照—检测样(N个),如果检测样比较多,可以在检测样后再加上一个阴性对照和阳性对照.上样量一般5-20微升(样品与上样buffer混合后),可以先做个普通的染色,看看条带有没有溢出,如果溢出了就上少点,太浅就上多点.都调整好了再继续做转印.
@姓虎5272：western blot转膜是怎么做的? -
符界18374604612…… 蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上.目前主流方法是电转印法,分为湿式转印与半干转印.湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印.以E-Blotter...
@姓虎5272：western blot的实验原理(详细的) -
符界18374604612…… Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗. 经过PAGE分离的蛋白质样品(跑PAGE 胶的原理你懂吧~~~),转移到固相载体(硝酸纤维素膜NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变(这个过程就是转膜). 以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达.
@姓虎5272：如何提细胞的组蛋白做western blot -
符界18374604612…… 你的意思就是提取核蛋白,提取核蛋白和提取全蛋白用的裂解液是不一样的.一般情况下我们都是买试剂盒,里面包含有细胞裂解液和核裂解液,按照说明书实用就行了. 1 20mmol/L的Hepe(PH 7.9) 2 420mmol/L NaCl 3 1.5mmol/L MgCl...
@姓虎5272：非还原状态的western blot 应该怎样做 -
符界18374604612…… 就是所有的缓冲液,上样缓冲液,配胶的缓冲液里面不加还原剂.
符界18374604612…… [答案] 什么是Westernblot? 最佳答案 Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测.对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测. 一、原理 与Southern或...
@姓虎5272：western blot 步骤是什么? -
符界18374604612…… 简单的说的话,可以大致分为8点:1. 收集蛋白样品2. 电泳3.转膜4.封闭5.一抗孵育 6.二抗孵育7.蛋白检测8.膜的重复利用,希望可以帮到你哦,你可以到网上找找啊
@姓虎5272：Western Blot转膜步骤谁能介绍一下? -
符界18374604612…… 1. 蛋白质抽提 实验对象为组织样品,取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白). 2. 蛋白质定量:按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度. 3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样,标准加进第一个孔中,电泳分离蛋白. 详细的Western Blot转膜步骤生物帮上面有详细介绍, http://product.bio1000.com/100078/ 抗体纯化产品
@姓虎5272：如何做western blot -
符界18374604612…… 用植物细胞做western blot 首先液氮保存叶片样品,用的时候研磨粉碎,再用蛋白提取液浸泡离心取上清 上清样品可以先去做定量检测 之后在样品中加上样缓冲液就可以进行western blot检测了
@姓虎5272：做western blot 实验,怎么煮蛋白 -
符界18374604612…… 根据样品形式的差异进行选择. 如果是研究纯化的蛋白,可以用100℃,煮5min就行; 如果是研究细胞样品的膜蛋白,可以用膜蛋白抽提试剂盒先做目的蛋白的富集,而后同上处理.
@姓虎5272：western blot实验怎么上样 -
符界18374604612…… 首先要设计上样的顺序,一般是让与抗体有反应的样品和没有反应的样品间隔开,这样条带之间反差比较明显.比如你的检测样能够与抗体反应,上样就是maker—阳性对照—阴性对照—检测样(N个),如果检测样比较多,可以在检测样后再加上一个阴性对照和阳性对照.上样量一般5-20微升(样品与上样buffer混合后),可以先做个普通的染色,看看条带有没有溢出,如果溢出了就上少点,太浅就上多点.都调整好了再继续做转印.
@姓虎5272：western blot转膜是怎么做的? -
符界18374604612…… 蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上.目前主流方法是电转印法,分为湿式转印与半干转印.湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印.以E-Blotter...
@姓虎5272：western blot的实验原理(详细的) -
符界18374604612…… Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗. 经过PAGE分离的蛋白质样品(跑PAGE 胶的原理你懂吧~~~),转移到固相载体(硝酸纤维素膜NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变(这个过程就是转膜). 以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达.
@姓虎5272：如何提细胞的组蛋白做western blot -
符界18374604612…… 你的意思就是提取核蛋白,提取核蛋白和提取全蛋白用的裂解液是不一样的.一般情况下我们都是买试剂盒,里面包含有细胞裂解液和核裂解液,按照说明书实用就行了. 1 20mmol/L的Hepe(PH 7.9) 2 420mmol/L NaCl 3 1.5mmol/L MgCl...
@姓虎5272：非还原状态的western blot 应该怎样做 -
符界18374604612…… 就是所有的缓冲液,上样缓冲液,配胶的缓冲液里面不加还原剂.
