βactin怎么做内参对照
@伏祝3542：Western Blot都可以用beta - actin做内参吗? -
罗竖18228191617…… 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin 做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用: 1、如果目的蛋白检测不...
@伏祝3542：做western blot时怎么做beta actin -
罗竖18228191617…… 是的,β-actin 是管家基因编码的细胞骨架蛋白,表达量在细胞内相对稳定,很少受到其他因素的影响,因此常被选作实验内参
@伏祝3542：在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 -
罗竖18228191617…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@伏祝3542：半定量PCR -
罗竖18228191617…… 半定量RT-PCR一般是在没有条件做 实时PCR 的情况下使用,用于测定体内目的基因的表达增加减少与否,即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因(如β-actin)的电泳带的相对含量比较,观测目的基因表达增减,另外还要做一个β-actin的内参照对照. 管家蛋白基因就是细胞内一些表达比较稳定的基因,如β-actin在各种细胞内的含量都稳定在10%左右.因此研究的目的基因的表达量与这些比较恒定含量的基因一比较,就可以观察到目的基因是否随着时间改变了~~~
@伏祝3542：elisa需要actin对照吗 -
罗竖18228191617…… WB中会设置内参,Actin即肌动蛋白,是细胞的一种重要骨架蛋白.β-actin的蛋白水平通常不会发生改变,因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照.
@伏祝3542：求助选择什么作为内参 -
罗竖18228191617…… 搞不太清楚你想说什么.内参抗体一般选择 β-actin,GAPDH.hsp90也OK.一般内参抗体都是鼠源的埃既然一抗是鼠源,二抗是接HRP的羊抗鼠就很好理解埃
@伏祝3542：【求助】为什么做PCR要做β -
罗竖18228191617…… β-actin是什么意思?为什么叫β-actin内参?在做PCR或者荧光定量PCR时为什么要做β-actin内参对照?如果没有做内参结果就不可靠吗?即使跑胶的效果很好.谢谢各位师兄师姐的指教β-actin即β肌动蛋白,是actin家族的一员,在维持细胞结构,细胞内运动,细胞分裂等细胞生理活动方面发挥着重要的作用,它是管家基因中的一种.管家基因 (house-keeping genes):是指所有细胞中均要. 表达的一类基因,其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的.例如β-actin、GAPDH等.在进行半定量PCR时,选择管家基因可以通过计算目的基因和内参的比值,得到基因表达的相对浓度.
@伏祝3542：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
罗竖18228191617…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@伏祝3542：α - 珠蛋白可以做内参吗 -
罗竖18228191617…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD.1、如果是提取的总蛋白,然后2113做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公5261认的东西.2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜4102蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理1653细胞,比较处理前后某种膜蛋专白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混属杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
罗竖18228191617…… 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin 做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用: 1、如果目的蛋白检测不...
@伏祝3542：做western blot时怎么做beta actin -
罗竖18228191617…… 是的,β-actin 是管家基因编码的细胞骨架蛋白,表达量在细胞内相对稳定,很少受到其他因素的影响,因此常被选作实验内参
@伏祝3542：在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 -
罗竖18228191617…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@伏祝3542：半定量PCR -
罗竖18228191617…… 半定量RT-PCR一般是在没有条件做 实时PCR 的情况下使用,用于测定体内目的基因的表达增加减少与否,即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因(如β-actin)的电泳带的相对含量比较,观测目的基因表达增减,另外还要做一个β-actin的内参照对照. 管家蛋白基因就是细胞内一些表达比较稳定的基因,如β-actin在各种细胞内的含量都稳定在10%左右.因此研究的目的基因的表达量与这些比较恒定含量的基因一比较,就可以观察到目的基因是否随着时间改变了~~~
@伏祝3542：elisa需要actin对照吗 -
罗竖18228191617…… WB中会设置内参,Actin即肌动蛋白,是细胞的一种重要骨架蛋白.β-actin的蛋白水平通常不会发生改变,因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照.
@伏祝3542：求助选择什么作为内参 -
罗竖18228191617…… 搞不太清楚你想说什么.内参抗体一般选择 β-actin,GAPDH.hsp90也OK.一般内参抗体都是鼠源的埃既然一抗是鼠源,二抗是接HRP的羊抗鼠就很好理解埃
@伏祝3542：【求助】为什么做PCR要做β -
罗竖18228191617…… β-actin是什么意思?为什么叫β-actin内参?在做PCR或者荧光定量PCR时为什么要做β-actin内参对照?如果没有做内参结果就不可靠吗?即使跑胶的效果很好.谢谢各位师兄师姐的指教β-actin即β肌动蛋白,是actin家族的一员,在维持细胞结构,细胞内运动,细胞分裂等细胞生理活动方面发挥着重要的作用,它是管家基因中的一种.管家基因 (house-keeping genes):是指所有细胞中均要. 表达的一类基因,其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的.例如β-actin、GAPDH等.在进行半定量PCR时,选择管家基因可以通过计算目的基因和内参的比值,得到基因表达的相对浓度.
@伏祝3542：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
罗竖18228191617…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@伏祝3542：α - 珠蛋白可以做内参吗 -
罗竖18228191617…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD.1、如果是提取的总蛋白,然后2113做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公5261认的东西.2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜4102蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理1653细胞,比较处理前后某种膜蛋专白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混属杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
