蓝白斑筛选时三种情况的原因
@任剑212：蓝白斑筛选问题 -
傅刷17571214925…… 那么,那些带一点蓝色的白斑你有没有做菌液PCR呢?或者测序呢? 我以前有见过带点蓝色的白斑,其实也是蓝斑. 没有白斑的原因,要么是没连上,要么是没转化成功. 从连接产物,到菌种都排查一下吧!
@任剑212：蓝白斑筛选假阴性 -
傅刷17571214925…… 此类载体携带lacZ'基因,它编码β-半乳糖苷酶的N-末端(α-肽),并且处于可被安慰诱导物IPTG(异丙基硫代半乳糖苷,与乳糖结构类似但不能被β-半乳糖苷酶降解)诱导的启动子调控之下.质粒转化的宿主菌为LacZ△M15 基因型(含有编码...
@任剑212：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
傅刷17571214925…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
@任剑212：基因克隆中蓝白斑筛选法筛选阳性克隆的原理. -
傅刷17571214925…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@任剑212：t克隆时蓝白斑筛选实验为什么蓝斑做菌落pcr也能扩出来 -
傅刷17571214925…… --蓝白斑筛选过程中,T载体:DNA=1:4,DNA为PCR纯化产物,--如果是摩尔比没什么问题.其实只要目的片段摩尔数高于载体就会有很好的结果.但是如果产物量太大,则会有不良的效果. 根据你的问题 1:检测纯化产物.出了问题后纯化产物一定...
@任剑212：做蓝白斑筛选为什么不长菌? -
傅刷17571214925…… 重新做感受态吧.之前都成功过的话八成就是感受态的问题了,要不就是你的载体有问题.
@任剑212：空载T19转进感受态中,蓝白斑筛选为什么显示蓝色菌落? -
傅刷17571214925…… 空载的话不就是lacZ里面没有插入东西么...仅仅是切开的载体,进入细胞后是可以自连的,那么lacZ不就又完整了
@任剑212：关于蓝白斑筛选的遇到的问题 -
傅刷17571214925…… 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@任剑212：蓝白筛选只有白斑 -
傅刷17571214925…… 是的 我也常遇到这样的情况 我猜想你插入的片段是300-1500BP之间 这样大小的片段是最好连接的 所以有很高的重组率 这是正常的 如果你还不放心可以挑一个单菌落 作一下酶切检定
@任剑212：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
傅刷17571214925…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
傅刷17571214925…… 那么,那些带一点蓝色的白斑你有没有做菌液PCR呢?或者测序呢? 我以前有见过带点蓝色的白斑,其实也是蓝斑. 没有白斑的原因,要么是没连上,要么是没转化成功. 从连接产物,到菌种都排查一下吧!
@任剑212：蓝白斑筛选假阴性 -
傅刷17571214925…… 此类载体携带lacZ'基因,它编码β-半乳糖苷酶的N-末端(α-肽),并且处于可被安慰诱导物IPTG(异丙基硫代半乳糖苷,与乳糖结构类似但不能被β-半乳糖苷酶降解)诱导的启动子调控之下.质粒转化的宿主菌为LacZ△M15 基因型(含有编码...
@任剑212：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
傅刷17571214925…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
@任剑212：基因克隆中蓝白斑筛选法筛选阳性克隆的原理. -
傅刷17571214925…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@任剑212：t克隆时蓝白斑筛选实验为什么蓝斑做菌落pcr也能扩出来 -
傅刷17571214925…… --蓝白斑筛选过程中,T载体:DNA=1:4,DNA为PCR纯化产物,--如果是摩尔比没什么问题.其实只要目的片段摩尔数高于载体就会有很好的结果.但是如果产物量太大,则会有不良的效果. 根据你的问题 1:检测纯化产物.出了问题后纯化产物一定...
@任剑212：做蓝白斑筛选为什么不长菌? -
傅刷17571214925…… 重新做感受态吧.之前都成功过的话八成就是感受态的问题了,要不就是你的载体有问题.
@任剑212：空载T19转进感受态中,蓝白斑筛选为什么显示蓝色菌落? -
傅刷17571214925…… 空载的话不就是lacZ里面没有插入东西么...仅仅是切开的载体,进入细胞后是可以自连的,那么lacZ不就又完整了
@任剑212：关于蓝白斑筛选的遇到的问题 -
傅刷17571214925…… 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@任剑212：蓝白筛选只有白斑 -
傅刷17571214925…… 是的 我也常遇到这样的情况 我猜想你插入的片段是300-1500BP之间 这样大小的片段是最好连接的 所以有很高的重组率 这是正常的 如果你还不放心可以挑一个单菌落 作一下酶切检定
@任剑212：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
傅刷17571214925…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
