蓝白斑筛选都是蓝斑的原因
@洪盆704：质粒dna的转化实验结果培养基上出现大量蓝斑和白斑分别是什么?为什么有这么多蓝斑? - 作业帮
丁夏13672948976…… [答案] 你用的是蓝白斑筛选,白斑为插入目的基因片段的转化子,蓝斑则没有,挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证.百度蓝白斑筛选.
@洪盆704：空载T19转进感受态中,蓝白斑筛选为什么显示蓝色菌落? -
丁夏13672948976…… 空载的话不就是lacZ里面没有插入东西么...仅仅是切开的载体,进入细胞后是可以自连的,那么lacZ不就又完整了
@洪盆704：蓝白斑筛选中的蓝斑是什么? 是载体自连产物吗? -
丁夏13672948976…… 载体上的是β-半乳糖苷酶基因(lacZ),他能使细菌表达β-半乳糖苷酶,该酶可以将X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖)降解,产生显色底物,然后我们就能看到蓝色斑.
@洪盆704：蓝白斑筛选问题 -
丁夏13672948976…… 那么,那些带一点蓝色的白斑你有没有做菌液PCR呢?或者测序呢? 我以前有见过带点蓝色的白斑,其实也是蓝斑. 没有白斑的原因,要么是没连上,要么是没转化成功. 从连接产物,到菌种都排查一下吧!
@洪盆704：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
丁夏13672948976…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
@洪盆704：蓝白斑筛选 没有白斑 -
丁夏13672948976…… 可能自连比较严重,建议从新做连接转化
@洪盆704：什么是文库滴度? -
丁夏13672948976…… 请教各位:1、我在做做cdna文库的时候滴度太低,并且做完蓝白斑筛选的时候几乎都是蓝斑,请问是什么原因导致的呢?2、我怀疑是外缘片段的问题,测浓度时候不仅浓度低而且有污染.我是严格按照ClontechcDNA文库构建试剂盒...
@洪盆704：求助:蓝白斑筛选的白色菌再次转化成蓝色??????
丁夏13672948976…… 同感,我也遇到同样的问题.将重组质粒转入JM109,鉴定阳性的质粒再转入BL21,结果全是蓝斑.
@洪盆704：关于蓝白斑筛选的遇到的问题 -
丁夏13672948976…… 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@洪盆704：蓝白筛选只有白斑 -
丁夏13672948976…… 是的 我也常遇到这样的情况 我猜想你插入的片段是300-1500BP之间 这样大小的片段是最好连接的 所以有很高的重组率 这是正常的 如果你还不放心可以挑一个单菌落 作一下酶切检定
丁夏13672948976…… [答案] 你用的是蓝白斑筛选,白斑为插入目的基因片段的转化子,蓝斑则没有,挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证.百度蓝白斑筛选.
@洪盆704：空载T19转进感受态中,蓝白斑筛选为什么显示蓝色菌落? -
丁夏13672948976…… 空载的话不就是lacZ里面没有插入东西么...仅仅是切开的载体,进入细胞后是可以自连的,那么lacZ不就又完整了
@洪盆704：蓝白斑筛选中的蓝斑是什么? 是载体自连产物吗? -
丁夏13672948976…… 载体上的是β-半乳糖苷酶基因(lacZ),他能使细菌表达β-半乳糖苷酶,该酶可以将X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖)降解,产生显色底物,然后我们就能看到蓝色斑.
@洪盆704：蓝白斑筛选问题 -
丁夏13672948976…… 那么,那些带一点蓝色的白斑你有没有做菌液PCR呢?或者测序呢? 我以前有见过带点蓝色的白斑,其实也是蓝斑. 没有白斑的原因,要么是没连上,要么是没转化成功. 从连接产物,到菌种都排查一下吧!
@洪盆704：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
丁夏13672948976…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
@洪盆704：蓝白斑筛选 没有白斑 -
丁夏13672948976…… 可能自连比较严重,建议从新做连接转化
@洪盆704：什么是文库滴度? -
丁夏13672948976…… 请教各位:1、我在做做cdna文库的时候滴度太低,并且做完蓝白斑筛选的时候几乎都是蓝斑,请问是什么原因导致的呢?2、我怀疑是外缘片段的问题,测浓度时候不仅浓度低而且有污染.我是严格按照ClontechcDNA文库构建试剂盒...
@洪盆704：求助:蓝白斑筛选的白色菌再次转化成蓝色??????
丁夏13672948976…… 同感,我也遇到同样的问题.将重组质粒转入JM109,鉴定阳性的质粒再转入BL21,结果全是蓝斑.
@洪盆704：关于蓝白斑筛选的遇到的问题 -
丁夏13672948976…… 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@洪盆704：蓝白筛选只有白斑 -
丁夏13672948976…… 是的 我也常遇到这样的情况 我猜想你插入的片段是300-1500BP之间 这样大小的片段是最好连接的 所以有很高的重组率 这是正常的 如果你还不放心可以挑一个单菌落 作一下酶切检定
