蓝白斑筛选和计算
@庄彩3360：蓝白斑筛选 - 搜狗百科
宁丹18984848557…… α-互补 的原理 载体上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列.这个编码区中插入了一个多克隆位点,但并没有破坏lacZ的阅读框架,不影响其正常功能.E. coli DH5α菌株带有β-半乳糖苷酶C端部分...
@庄彩3360：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
宁丹18984848557…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
@庄彩3360：筛选产β - 半乳糖苷酶的菌种 -
宁丹18984848557…… 1.平板筛选培养基:胰蛋白胨15g,蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏1g,NaCl 5g,琼脂15g,X-gal0.1g,蒸馏水1 000ml,pH 7.0~7.2.2.摇瓶筛选培养基:乳糖1%,胰蛋白胨15g,豆蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏3g,NaCl 5g,蒸馏水1000...
@庄彩3360：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
宁丹18984848557…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
@庄彩3360：急用!分子生物学的名词解释 -
宁丹18984848557…… 一、AP endonucleases (AP 核酸内切酶):剪切掉DNA 5¢端脱嘌呤和脱嘧啶位点的酶. 二、顺式作用元件(cis-acting element):存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列.三、recA和umuD.C参与一种机制不清的易错修复,也就是损伤修复.四、常指新合成多肽链中用于指导蛋白质跨膜转移(定位)的N-末端的氨基酸序列(有时不一定在N端).
@庄彩3360：蓝白斑筛选中氨苄青霉素的终浓度是多少 -
宁丹18984848557…… 终浓度均为100ug/ml.配制的都是100mg/ml的贮存液,按1:1000加入到培养基里.
@庄彩3360：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
宁丹18984848557…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@庄彩3360：质粒dna的转化实验结果培养基上出现大量蓝斑和白斑分别是什么?为什么有这么多蓝斑? - 作业帮
宁丹18984848557…… [答案] 你用的是蓝白斑筛选,白斑为插入目的基因片段的转化子,蓝斑则没有,挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证.百度蓝白斑筛选.
宁丹18984848557…… α-互补 的原理 载体上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列.这个编码区中插入了一个多克隆位点,但并没有破坏lacZ的阅读框架,不影响其正常功能.E. coli DH5α菌株带有β-半乳糖苷酶C端部分...
@庄彩3360：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
宁丹18984848557…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
@庄彩3360：筛选产β - 半乳糖苷酶的菌种 -
宁丹18984848557…… 1.平板筛选培养基:胰蛋白胨15g,蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏1g,NaCl 5g,琼脂15g,X-gal0.1g,蒸馏水1 000ml,pH 7.0~7.2.2.摇瓶筛选培养基:乳糖1%,胰蛋白胨15g,豆蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏3g,NaCl 5g,蒸馏水1000...
@庄彩3360：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
宁丹18984848557…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
@庄彩3360：急用!分子生物学的名词解释 -
宁丹18984848557…… 一、AP endonucleases (AP 核酸内切酶):剪切掉DNA 5¢端脱嘌呤和脱嘧啶位点的酶. 二、顺式作用元件(cis-acting element):存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列.三、recA和umuD.C参与一种机制不清的易错修复,也就是损伤修复.四、常指新合成多肽链中用于指导蛋白质跨膜转移(定位)的N-末端的氨基酸序列(有时不一定在N端).
@庄彩3360：蓝白斑筛选中氨苄青霉素的终浓度是多少 -
宁丹18984848557…… 终浓度均为100ug/ml.配制的都是100mg/ml的贮存液,按1:1000加入到培养基里.
@庄彩3360：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
宁丹18984848557…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@庄彩3360：质粒dna的转化实验结果培养基上出现大量蓝斑和白斑分别是什么?为什么有这么多蓝斑? - 作业帮
宁丹18984848557…… [答案] 你用的是蓝白斑筛选,白斑为插入目的基因片段的转化子,蓝斑则没有,挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证.百度蓝白斑筛选.
