蓝白斑筛选大肠杆菌
@酆义1520：蓝白菌斑的原理是什么? -
白龙13716537878…… 蓝白斑筛选的原理 分类:生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和...
@酆义1520：蓝白斑筛选 -
白龙13716537878…… α-互补 的原理 载体上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列.这个编码区中插入了一个多克隆位点,但并没有破坏lacZ的阅读框架,不影响其正常功能.E. coli DH5α菌株带有β-半乳糖苷酶C端部分...
@酆义1520：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
白龙13716537878…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
@酆义1520：蓝白斑筛选时用的大肠杆菌质粒有抗性基因吗 -
白龙13716537878…… 不一定,因为只要大肠杆菌的B半乳糖基因被外源基因插入切断,就无法形成完整的B半乳糖基因,从而无法催化形成蓝色物质,则菌落呈白色,所以不一定是抗性基因,任何外源基因在那个位置插入都可以
@酆义1520：大肠杆菌转化与未转化的区别 -
白龙13716537878…… 大肠杆菌转化与未转化的区别 一般都要蓝白斑筛选 还要在培养基中添加抗生素 为转化的菌株不含质粒 没有抗生素抗性 所以不能生长 但转化的菌株可能是载体自连 故还要进行蓝白斑筛选 挑取蓝斑 可通过PCR进行进一步鉴定
@酆义1520：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
白龙13716537878…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
@酆义1520：外源基因与pUC18载体连接后,导入大肠杆菌细胞中,在选择性培养基中应该是挑取白斑还是蓝班? -
白龙13716537878…… 这属于蓝白斑筛选 挑白斑 野生型大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝.编辑本段适用方面设计适用于蓝白斑筛选的基因工程菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌...
@酆义1520：如何提高样品中所筛选菌株的比例 -
白龙13716537878…… 提高筛选的成功率首先要注意无菌操作,不要人工引入额外的杂菌,有条件的话全程应该在超净台中进行.然后就是按照目标菌种的特性,引入一些营养缺陷,或者抗生素,进行涂板挑选.一般的菌株都会有某种抗性基因,以供加入对应的抗生...
@酆义1520：蓝白筛选原理? -
白龙13716537878…… 如果没有克隆外源性DNA片段,在质粒被导入lac-的大肠杆菌后,质粒携带的半乳糖苷酶基因将正常表达,与大肠杆菌的半乳糖苷酶基因互补,产生有活性的半乳糖苷酶,加入人工底物X-gal和诱导剂IPTG后,出现蓝色的菌落.
白龙13716537878…… 蓝白斑筛选的原理 分类:生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和...
@酆义1520：蓝白斑筛选 -
白龙13716537878…… α-互补 的原理 载体上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列.这个编码区中插入了一个多克隆位点,但并没有破坏lacZ的阅读框架,不影响其正常功能.E. coli DH5α菌株带有β-半乳糖苷酶C端部分...
@酆义1520：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
白龙13716537878…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
@酆义1520：蓝白斑筛选时用的大肠杆菌质粒有抗性基因吗 -
白龙13716537878…… 不一定,因为只要大肠杆菌的B半乳糖基因被外源基因插入切断,就无法形成完整的B半乳糖基因,从而无法催化形成蓝色物质,则菌落呈白色,所以不一定是抗性基因,任何外源基因在那个位置插入都可以
@酆义1520：大肠杆菌转化与未转化的区别 -
白龙13716537878…… 大肠杆菌转化与未转化的区别 一般都要蓝白斑筛选 还要在培养基中添加抗生素 为转化的菌株不含质粒 没有抗生素抗性 所以不能生长 但转化的菌株可能是载体自连 故还要进行蓝白斑筛选 挑取蓝斑 可通过PCR进行进一步鉴定
@酆义1520：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
白龙13716537878…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
@酆义1520：外源基因与pUC18载体连接后,导入大肠杆菌细胞中,在选择性培养基中应该是挑取白斑还是蓝班? -
白龙13716537878…… 这属于蓝白斑筛选 挑白斑 野生型大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝.编辑本段适用方面设计适用于蓝白斑筛选的基因工程菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌...
@酆义1520：如何提高样品中所筛选菌株的比例 -
白龙13716537878…… 提高筛选的成功率首先要注意无菌操作,不要人工引入额外的杂菌,有条件的话全程应该在超净台中进行.然后就是按照目标菌种的特性,引入一些营养缺陷,或者抗生素,进行涂板挑选.一般的菌株都会有某种抗性基因,以供加入对应的抗生...
@酆义1520：蓝白筛选原理? -
白龙13716537878…… 如果没有克隆外源性DNA片段,在质粒被导入lac-的大肠杆菌后,质粒携带的半乳糖苷酶基因将正常表达,与大肠杆菌的半乳糖苷酶基因互补,产生有活性的半乳糖苷酶,加入人工底物X-gal和诱导剂IPTG后,出现蓝色的菌落.
