蓝白斑筛选平板的配制
@钱红4243：如何制备用于蓝白筛选的培养基 -
甫阁13268117466…… 先配置普通的LB培养基,然后高压灭菌后,让培养基冷却到60度左右,加入合适的抗生素(AMP等),接着倒平板.然后配置(20mg/ml)的X-gal(用二甲基甲酰胺溶解)和200mg/ml的IPTG(水溶).在做蓝白筛选前,在平板上加入40ul的X-gal和4ul的IPTG(注意顺序,IPTG加在X-gal液滴上),然后用玻璃棒均匀涂开,稍微干下后就可以涂转化的感受态细胞了,平板最好是现涂现用,虽然可以在四度冰箱中存一周左右,但会降低效果.X-gal易见光分解,不用灭菌储存在-20冰箱.IPTG配置储存液的时候需要过滤菌膜后才能使用.
@钱红4243：筛选产β - 半乳糖苷酶的菌种 -
甫阁13268117466…… 1.平板筛选培养基:胰蛋白胨15g,蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏1g,NaCl 5g,琼脂15g,X-gal0.1g,蒸馏水1 000ml,pH 7.0~7.2.2.摇瓶筛选培养基:乳糖1%,胰蛋白胨15g,豆蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏3g,NaCl 5g,蒸馏水1000...
@钱红4243：LB/IPTG/Xgal 平板 -
甫阁13268117466…… 这个平板是用来做大肠杆菌的蓝白斑筛选转化子用的.
@钱红4243：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
甫阁13268117466…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@钱红4243：蓝白斑筛选 -
甫阁13268117466…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@钱红4243：请问IPTG如何配置?AT克隆蓝白斑筛选用 -
甫阁13268117466…… 直接买现成配置好的得了,买华越洋生物的IPTG溶液,也很便宜.
@钱红4243：Easy - T - vector 与蓝白筛选
甫阁13268117466…… 线性化的T-载体末端多出T,无法自连为环状,你用线性化的T-载体直接转化DH5a,T-载体进入细胞后仍然是线性的,所以质粒无法编码β-半乳糖苷酶N端的146个氨基酸,也就不能形成a-互补,所以形成白斑.但形成的白斑应该很少,因为线性化的质粒导入细胞是比较困难的.这一点是正常的.你的理解也很正确. 为何产品说明书上说可以做蓝白斑筛选呢? 因为我们用T-载体都是同外源基因连接后才导入细胞的,切线性化质粒很难导入细胞,所以几乎可以认为在IPTG-X-gal平板上出现白斑的就是阳性克隆(并非百分百是),所以说明书上也就这么说了.
@钱红4243：如何提高样品中所筛选菌株的比例 -
甫阁13268117466…… 提高筛选的成功率首先要注意无菌操作,不要人工引入额外的杂菌,有条件的话全程应该在超净台中进行.然后就是按照目标菌种的特性,引入一些营养缺陷,或者抗生素,进行涂板挑选.一般的菌株都会有某种抗性基因,以供加入对应的抗生...
@钱红4243：蓝白菌斑的原理是什么? -
甫阁13268117466…… 蓝白斑筛选的原理 分类:生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和...
@钱红4243：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
甫阁13268117466…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
甫阁13268117466…… 先配置普通的LB培养基,然后高压灭菌后,让培养基冷却到60度左右,加入合适的抗生素(AMP等),接着倒平板.然后配置(20mg/ml)的X-gal(用二甲基甲酰胺溶解)和200mg/ml的IPTG(水溶).在做蓝白筛选前,在平板上加入40ul的X-gal和4ul的IPTG(注意顺序,IPTG加在X-gal液滴上),然后用玻璃棒均匀涂开,稍微干下后就可以涂转化的感受态细胞了,平板最好是现涂现用,虽然可以在四度冰箱中存一周左右,但会降低效果.X-gal易见光分解,不用灭菌储存在-20冰箱.IPTG配置储存液的时候需要过滤菌膜后才能使用.
@钱红4243：筛选产β - 半乳糖苷酶的菌种 -
甫阁13268117466…… 1.平板筛选培养基:胰蛋白胨15g,蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏1g,NaCl 5g,琼脂15g,X-gal0.1g,蒸馏水1 000ml,pH 7.0~7.2.2.摇瓶筛选培养基:乳糖1%,胰蛋白胨15g,豆蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏3g,NaCl 5g,蒸馏水1000...
@钱红4243：LB/IPTG/Xgal 平板 -
甫阁13268117466…… 这个平板是用来做大肠杆菌的蓝白斑筛选转化子用的.
@钱红4243：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
甫阁13268117466…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@钱红4243：蓝白斑筛选 -
甫阁13268117466…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@钱红4243：请问IPTG如何配置?AT克隆蓝白斑筛选用 -
甫阁13268117466…… 直接买现成配置好的得了,买华越洋生物的IPTG溶液,也很便宜.
@钱红4243：Easy - T - vector 与蓝白筛选
甫阁13268117466…… 线性化的T-载体末端多出T,无法自连为环状,你用线性化的T-载体直接转化DH5a,T-载体进入细胞后仍然是线性的,所以质粒无法编码β-半乳糖苷酶N端的146个氨基酸,也就不能形成a-互补,所以形成白斑.但形成的白斑应该很少,因为线性化的质粒导入细胞是比较困难的.这一点是正常的.你的理解也很正确. 为何产品说明书上说可以做蓝白斑筛选呢? 因为我们用T-载体都是同外源基因连接后才导入细胞的,切线性化质粒很难导入细胞,所以几乎可以认为在IPTG-X-gal平板上出现白斑的就是阳性克隆(并非百分百是),所以说明书上也就这么说了.
@钱红4243：如何提高样品中所筛选菌株的比例 -
甫阁13268117466…… 提高筛选的成功率首先要注意无菌操作,不要人工引入额外的杂菌,有条件的话全程应该在超净台中进行.然后就是按照目标菌种的特性,引入一些营养缺陷,或者抗生素,进行涂板挑选.一般的菌株都会有某种抗性基因,以供加入对应的抗生...
@钱红4243：蓝白菌斑的原理是什么? -
甫阁13268117466…… 蓝白斑筛选的原理 分类:生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和...
@钱红4243：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
甫阁13268117466…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
