蓝白斑筛选xgal涂多少
@饶通4466：蓝白斑筛选加多了氨苄IPTGXGAL会影响?蓝白斑筛选加多了氨苄
师唐17359825184…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@饶通4466：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
师唐17359825184…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@饶通4466：关于蓝白斑筛选的遇到的问题 -
师唐17359825184…… 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@饶通4466：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
师唐17359825184…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
@饶通4466：菌液的作用有哪些?
师唐17359825184…… 7. 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话,滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal,8 μl 20% IPTG,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀. 以上是对这个问题的回答,希望对您有帮助.
@饶通4466：X - Gal的介绍 -
师唐17359825184…… X-gal也称5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside或5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside,X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的显色底物,在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物.常用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选.
@饶通4466：蓝白斑筛选中氨苄青霉素的终浓度是多少
师唐17359825184…… 25ug/ml~50ug/ml即可,不过一般通常多加点,大概100ug/ml 配制的时候配100mg/ml的储液,然后按1:1000加入到培养基中
@饶通4466：蓝白斑筛选 -
师唐17359825184…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@饶通4466：如何提高样品中所筛选菌株的比例 -
师唐17359825184…… 提高筛选的成功率首先要注意无菌操作,不要人工引入额外的杂菌,有条件的话全程应该在超净台中进行.然后就是按照目标菌种的特性,引入一些营养缺陷,或者抗生素,进行涂板挑选.一般的菌株都会有某种抗性基因,以供加入对应的抗生...
@饶通4466：筛选产β - 半乳糖苷酶的菌种 -
师唐17359825184…… 1.平板筛选培养基:胰蛋白胨15g,蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏1g,NaCl 5g,琼脂15g,X-gal0.1g,蒸馏水1 000ml,pH 7.0~7.2.2.摇瓶筛选培养基:乳糖1%,胰蛋白胨15g,豆蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏3g,NaCl 5g,蒸馏水1000...
师唐17359825184…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@饶通4466：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
师唐17359825184…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@饶通4466：关于蓝白斑筛选的遇到的问题 -
师唐17359825184…… 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@饶通4466：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
师唐17359825184…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
@饶通4466：菌液的作用有哪些?
师唐17359825184…… 7. 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话,滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal,8 μl 20% IPTG,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀. 以上是对这个问题的回答,希望对您有帮助.
@饶通4466：X - Gal的介绍 -
师唐17359825184…… X-gal也称5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside或5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside,X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的显色底物,在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物.常用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选.
@饶通4466：蓝白斑筛选中氨苄青霉素的终浓度是多少
师唐17359825184…… 25ug/ml~50ug/ml即可,不过一般通常多加点,大概100ug/ml 配制的时候配100mg/ml的储液,然后按1:1000加入到培养基中
@饶通4466：蓝白斑筛选 -
师唐17359825184…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@饶通4466：如何提高样品中所筛选菌株的比例 -
师唐17359825184…… 提高筛选的成功率首先要注意无菌操作,不要人工引入额外的杂菌,有条件的话全程应该在超净台中进行.然后就是按照目标菌种的特性,引入一些营养缺陷,或者抗生素,进行涂板挑选.一般的菌株都会有某种抗性基因,以供加入对应的抗生...
@饶通4466：筛选产β - 半乳糖苷酶的菌种 -
师唐17359825184…… 1.平板筛选培养基:胰蛋白胨15g,蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏1g,NaCl 5g,琼脂15g,X-gal0.1g,蒸馏水1 000ml,pH 7.0~7.2.2.摇瓶筛选培养基:乳糖1%,胰蛋白胨15g,豆蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏3g,NaCl 5g,蒸馏水1000...
