βactin用什么二抗
@政逄3657：Western Blot都可以用beta - actin做内参吗? -
洪彪13250003055…… 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin 做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用: 1、如果目的蛋白检测不...
@政逄3657：western blot的抗体怎么选择? -
洪彪13250003055…… 做原核表达蛋白western一个要注意的问题就是上样的蛋白不能太大,最好在100ng以下.以防止因为蛋白量太大引起非特异性信号.
@政逄3657：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
洪彪13250003055…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@政逄3657：western blot内参抗体actin为什么出了好几条带 -
洪彪13250003055…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@政逄3657：求助选择什么作为内参 -
洪彪13250003055…… 搞不太清楚你想说什么.内参抗体一般选择 β-actin,GAPDH.hsp90也OK.一般内参抗体都是鼠源的埃既然一抗是鼠源,二抗是接HRP的羊抗鼠就很好理解埃
@政逄3657：做western blot时怎么做beta actin -
洪彪13250003055…… 是的,β-actin 是管家基因编码的细胞骨架蛋白,表达量在细胞内相对稳定,很少受到其他因素的影响,因此常被选作实验内参
@政逄3657：在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 -
洪彪13250003055…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@政逄3657：关于WESTERN BLOT的内参 -
洪彪13250003055…… 肯定要加二抗啊,内参和你的目的蛋白是一样的,也是一个蛋白,只不过表达比你的目的蛋白在各个组织之间恒定许多,它是你的目的蛋白的一个参照,但是它的作用和mark还不一样,所以内参是一定要要的,否则,人家会质疑你实验的可信性. 如果你的实验动物是大鼠,打个比方一抗是兔抗鼠吧或者其他的什么抗鼠的,二抗就是什么抗兔的,比如说羊抗兔之类,一抗最好买国外的,二抗国内的就可以了
@政逄3657：我做West blot是膜蛋白检测该用什么作内参,急 -
洪彪13250003055…… 一般western bloting 都用gapdh吧,也有听说用β-actin的,gapdh用的最广泛,而且也最稳定啊~ 这个貌似也没说做什么类型的蛋白必须对应哪一种,就是找个管家基因就好. 希望能够帮到你~望采纳~谢谢~
洪彪13250003055…… 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin 做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用: 1、如果目的蛋白检测不...
@政逄3657：western blot的抗体怎么选择? -
洪彪13250003055…… 做原核表达蛋白western一个要注意的问题就是上样的蛋白不能太大,最好在100ng以下.以防止因为蛋白量太大引起非特异性信号.
@政逄3657：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
洪彪13250003055…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@政逄3657：western blot内参抗体actin为什么出了好几条带 -
洪彪13250003055…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@政逄3657：求助选择什么作为内参 -
洪彪13250003055…… 搞不太清楚你想说什么.内参抗体一般选择 β-actin,GAPDH.hsp90也OK.一般内参抗体都是鼠源的埃既然一抗是鼠源,二抗是接HRP的羊抗鼠就很好理解埃
@政逄3657：做western blot时怎么做beta actin -
洪彪13250003055…… 是的,β-actin 是管家基因编码的细胞骨架蛋白,表达量在细胞内相对稳定,很少受到其他因素的影响,因此常被选作实验内参
@政逄3657：在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 -
洪彪13250003055…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@政逄3657：关于WESTERN BLOT的内参 -
洪彪13250003055…… 肯定要加二抗啊,内参和你的目的蛋白是一样的,也是一个蛋白,只不过表达比你的目的蛋白在各个组织之间恒定许多,它是你的目的蛋白的一个参照,但是它的作用和mark还不一样,所以内参是一定要要的,否则,人家会质疑你实验的可信性. 如果你的实验动物是大鼠,打个比方一抗是兔抗鼠吧或者其他的什么抗鼠的,二抗就是什么抗兔的,比如说羊抗兔之类,一抗最好买国外的,二抗国内的就可以了
@政逄3657：我做West blot是膜蛋白检测该用什么作内参,急 -
洪彪13250003055…… 一般western bloting 都用gapdh吧,也有听说用β-actin的,gapdh用的最广泛,而且也最稳定啊~ 这个貌似也没说做什么类型的蛋白必须对应哪一种,就是找个管家基因就好. 希望能够帮到你~望采纳~谢谢~
