β+actin引物
@湛缪2336：请问:不同物种中(如一种植物和一种动物)的同一种管家基因(如β - actin)的cDNA序列是否相同?请问:能不能直接拿一种植物的管家基因的引物序列来... - 作业帮
康邵15916399452…… [答案] 是不同的.
@湛缪2336：做RT与Western能 用同一个β - actin吗? - 作业帮
康邵15916399452…… [答案] RT是核酸水平,western是蛋白水平;一个用actin引物,一个用actin抗体,如何用同一个actin?不太明白
@湛缪2336：“RT - PCR扩增目的基因cDNA”需要注意的事项有哪些? -
康邵15916399452…… RT-PCR 是将 RNA 的反转录(RT)和 cDNA 的聚合酶链式扩增(PCR)相结 合的技术.首先经反转录酶的作用从 RNA 合成 cDNA,再以 cDNA 为模板, 扩增合成目的片段.RT-PCR 技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基 因表达水平...
@湛缪2336：我提取出转基因小鼠的基因组后,对基因组中β - actin序列进行扩增,引物如何设计呢? -
康邵15916399452…… 在线引物设计站点http://www.bioon.com/experiment/mob/68994.shtml 请参考PCR引物设计的黄金法则http://hi.baidu.com/kingstar3w/blog/item/0278c2de9ec7185794ee3711.html
@湛缪2336：半定量PCR -
康邵15916399452…… 半定量RT-PCR一般是在没有条件做 实时PCR 的情况下使用,用于测定体内目的基因的表达增加减少与否,即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因(如β-actin)的电泳带的相对含量比较,观测目的基因表达增减,另外还要做一个β-actin的内参照对照. 管家蛋白基因就是细胞内一些表达比较稳定的基因,如β-actin在各种细胞内的含量都稳定在10%左右.因此研究的目的基因的表达量与这些比较恒定含量的基因一比较,就可以观察到目的基因是否随着时间改变了~~~
@湛缪2336：反转录cDNA第一链,进行PCR扩增,只有引物二聚体,怎么办呢? -
康邵15916399452…… 两个原因:1、反转失败,模板里没有DNA;2、PCR失败,例如引物不行,退火温度不对等.这也没办法了,你先确定引物能不能从基因组里扩出条带.不过这种情况很可能是反转失败了.
@湛缪2336：反向PCR怎么做 -
康邵15916399452…… 反向pcr(inverse pcr)反向pcr是一种多聚合酶链式反应(pcr)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知rma成几何级数扩增.用适当的限制性内切裂解含核心区的rma,以产生适合于pcr扩增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子.pcr的引物同源于环上核心区的末端序列,但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区.这种反向pcr方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序.
@湛缪2336：求助水稻的actin 内参基因引物 -
康邵15916399452…… 在这个专利文件里面有全长,引物你自己设计吧 http://www.google.com/patents/download/5641876_Rice_actin_gene_and_promoter.pdf?id=TEApAAAAEBAJ&output=pdf&sig=ACfU3U0XOeQP4z3gDHb20ne9M2PjiV14xg&source=gbs_overview_r&cad=0
@湛缪2336：实时荧光定量PCR的结果该怎样分析? -
康邵15916399452…… 1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算; 2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算; 3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性; 4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起; 5、看CT值是分析...
@湛缪2336：用actin基因检测反转录结果,是怎么操作?具体点,谢谢... -
康邵15916399452…… Actin是管家基因,在任何组织和任何发育阶段表达量都是恒定的,所以我们用Actin来检测反转录时RNA有没有问题,以及反转录的目的基因表达量如何.所以你要用actin的话,你需要先设计一对actin的引物,然后用actin的引物去跑RT-PCR,如果电泳Actin条带,那么你再用同样的RNA或者cDNA模板做RT-PCR,这样你的结果就是可靠的.
康邵15916399452…… [答案] 是不同的.
@湛缪2336：做RT与Western能 用同一个β - actin吗? - 作业帮
康邵15916399452…… [答案] RT是核酸水平,western是蛋白水平;一个用actin引物,一个用actin抗体,如何用同一个actin?不太明白
@湛缪2336：“RT - PCR扩增目的基因cDNA”需要注意的事项有哪些? -
康邵15916399452…… RT-PCR 是将 RNA 的反转录(RT)和 cDNA 的聚合酶链式扩增(PCR)相结 合的技术.首先经反转录酶的作用从 RNA 合成 cDNA,再以 cDNA 为模板, 扩增合成目的片段.RT-PCR 技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基 因表达水平...
@湛缪2336：我提取出转基因小鼠的基因组后,对基因组中β - actin序列进行扩增,引物如何设计呢? -
康邵15916399452…… 在线引物设计站点http://www.bioon.com/experiment/mob/68994.shtml 请参考PCR引物设计的黄金法则http://hi.baidu.com/kingstar3w/blog/item/0278c2de9ec7185794ee3711.html
@湛缪2336：半定量PCR -
康邵15916399452…… 半定量RT-PCR一般是在没有条件做 实时PCR 的情况下使用,用于测定体内目的基因的表达增加减少与否,即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因(如β-actin)的电泳带的相对含量比较,观测目的基因表达增减,另外还要做一个β-actin的内参照对照. 管家蛋白基因就是细胞内一些表达比较稳定的基因,如β-actin在各种细胞内的含量都稳定在10%左右.因此研究的目的基因的表达量与这些比较恒定含量的基因一比较,就可以观察到目的基因是否随着时间改变了~~~
@湛缪2336：反转录cDNA第一链,进行PCR扩增,只有引物二聚体,怎么办呢? -
康邵15916399452…… 两个原因:1、反转失败,模板里没有DNA;2、PCR失败,例如引物不行,退火温度不对等.这也没办法了,你先确定引物能不能从基因组里扩出条带.不过这种情况很可能是反转失败了.
@湛缪2336：反向PCR怎么做 -
康邵15916399452…… 反向pcr(inverse pcr)反向pcr是一种多聚合酶链式反应(pcr)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知rma成几何级数扩增.用适当的限制性内切裂解含核心区的rma,以产生适合于pcr扩增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子.pcr的引物同源于环上核心区的末端序列,但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区.这种反向pcr方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序.
@湛缪2336：求助水稻的actin 内参基因引物 -
康邵15916399452…… 在这个专利文件里面有全长,引物你自己设计吧 http://www.google.com/patents/download/5641876_Rice_actin_gene_and_promoter.pdf?id=TEApAAAAEBAJ&output=pdf&sig=ACfU3U0XOeQP4z3gDHb20ne9M2PjiV14xg&source=gbs_overview_r&cad=0
@湛缪2336：实时荧光定量PCR的结果该怎样分析? -
康邵15916399452…… 1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算; 2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算; 3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性; 4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起; 5、看CT值是分析...
@湛缪2336：用actin基因检测反转录结果,是怎么操作?具体点,谢谢... -
康邵15916399452…… Actin是管家基因,在任何组织和任何发育阶段表达量都是恒定的,所以我们用Actin来检测反转录时RNA有没有问题,以及反转录的目的基因表达量如何.所以你要用actin的话,你需要先设计一对actin的引物,然后用actin的引物去跑RT-PCR,如果电泳Actin条带,那么你再用同样的RNA或者cDNA模板做RT-PCR,这样你的结果就是可靠的.
