βactin条带
@靳欧5641：weternblotting实验βactin没条带,目标蛋白条带不好,什么原因 -
崔新19769815473…… 原因如下: 1,可能是上样浓度太大, 2,还有可能是,转印的时候膜没有铺好, 3,或取下来的时候拖动膜了.解决方法:换换转印缓冲液,增加点甲醇的浓度. Western Blot中文一般称为蛋白质印迹.它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法.其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色.通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息.
@靳欧5641：western blot内参抗体actin为什么出了好几条带 -
崔新19769815473…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@靳欧5641：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
崔新19769815473…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@靳欧5641：为什么用全基因组扩β - actin会出现非特异性条带? -
崔新19769815473…… PCR条件不好,尤其是引物设计不好,因为全基因组总有类似序列
@靳欧5641：β - action基因是什么 -
崔新19769815473…… β-Actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分,也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分.具有收缩功能,分布广泛. http://baike.baidu.com/view/4083940.htm β-Actin基因就是编码这种蛋白的基因.
@靳欧5641：什么是β - actin 基因 -
崔新19769815473…… Actin即“肌动蛋白”,是细胞的一种重要骨架蛋白.同时Actin在细胞分泌、吞噬、 β-Actin 移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用.
@靳欧5641：我做RT - PCR要用Marker和β - actin吗? -
崔新19769815473…… 需要Maker的,不然你不知道你扩出来的条带是不是你需要的.另外内参(actin 是在生物发育的每个阶段都会表达,应该就是一个管家基因靶,所以可以拿出来当内参的)也是需要的,这样可以对你跑出来的目的基因和内参做一下比较,做一下半定量.
@靳欧5641：实时荧光定量pcr,结果出现蓝色线条的原因? -
崔新19769815473…… 如果有标准曲线,按照标准曲线计算.一般都是相对量.则用delta delta CT方法来计算.举例如下:对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15.实验组基因A CT值18,内参CT值14.首先算加样量:delta CT=15-14=1.2的1次方...
@靳欧5641：β - actin基因多长? -
崔新19769815473…… 一楼误人子弟了!根据pubmed数据库(见链接)显示,人类β-actin基因长3454bp.其他物种的同源基因长度会有所不同.
@靳欧5641：WB杂出来的actin为什么两条带 -
崔新19769815473…… 出现两条带是非常正常的现象. 抗体的原因:不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异,大部分都能检测到目的条带,但是有时能检测到非特异性的条带; 蛋白亚型表达的原因:我做了大概两年半的WB,经常会发现,一种蛋白有时检测压型很...
崔新19769815473…… 原因如下: 1,可能是上样浓度太大, 2,还有可能是,转印的时候膜没有铺好, 3,或取下来的时候拖动膜了.解决方法:换换转印缓冲液,增加点甲醇的浓度. Western Blot中文一般称为蛋白质印迹.它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法.其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色.通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息.
@靳欧5641：western blot内参抗体actin为什么出了好几条带 -
崔新19769815473…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@靳欧5641：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
崔新19769815473…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@靳欧5641：为什么用全基因组扩β - actin会出现非特异性条带? -
崔新19769815473…… PCR条件不好,尤其是引物设计不好,因为全基因组总有类似序列
@靳欧5641：β - action基因是什么 -
崔新19769815473…… β-Actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分,也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分.具有收缩功能,分布广泛. http://baike.baidu.com/view/4083940.htm β-Actin基因就是编码这种蛋白的基因.
@靳欧5641：什么是β - actin 基因 -
崔新19769815473…… Actin即“肌动蛋白”,是细胞的一种重要骨架蛋白.同时Actin在细胞分泌、吞噬、 β-Actin 移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用.
@靳欧5641：我做RT - PCR要用Marker和β - actin吗? -
崔新19769815473…… 需要Maker的,不然你不知道你扩出来的条带是不是你需要的.另外内参(actin 是在生物发育的每个阶段都会表达,应该就是一个管家基因靶,所以可以拿出来当内参的)也是需要的,这样可以对你跑出来的目的基因和内参做一下比较,做一下半定量.
@靳欧5641：实时荧光定量pcr,结果出现蓝色线条的原因? -
崔新19769815473…… 如果有标准曲线,按照标准曲线计算.一般都是相对量.则用delta delta CT方法来计算.举例如下:对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15.实验组基因A CT值18,内参CT值14.首先算加样量:delta CT=15-14=1.2的1次方...
@靳欧5641：β - actin基因多长? -
崔新19769815473…… 一楼误人子弟了!根据pubmed数据库(见链接)显示,人类β-actin基因长3454bp.其他物种的同源基因长度会有所不同.
@靳欧5641：WB杂出来的actin为什么两条带 -
崔新19769815473…… 出现两条带是非常正常的现象. 抗体的原因:不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异,大部分都能检测到目的条带,但是有时能检测到非特异性的条带; 蛋白亚型表达的原因:我做了大概两年半的WB,经常会发现,一种蛋白有时检测压型很...
