内参蛋白actin
@利祁6423：PCR反应体系中的Actin是什么 -
宰舒19193495477…… 定量或半定量PCR中内参的一种,全称是β-Actin
@利祁6423：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
宰舒19193495477…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@利祁6423：elisa需要actin对照吗 -
宰舒19193495477…… WB中会设置内参,Actin即肌动蛋白,是细胞的一种重要骨架蛋白.β-actin的蛋白水平通常不会发生改变,因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照.
@利祁6423：α - 珠蛋白可以做内参吗 -
宰舒19193495477…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD.1、如果是提取的总蛋白,然后2113做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公5261认的东西.2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜4102蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理1653细胞,比较处理前后某种膜蛋专白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混属杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@利祁6423：western blot内参抗体actin为什么出了好几条带 -
宰舒19193495477…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@利祁6423：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
宰舒19193495477…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
@利祁6423：康为世纪的Actin内参怎么样?有人用过么?
宰舒19193495477…… 可以啊,β-actin是一种持家蛋白,当然可以用作qPCR内参. 以上是对这个问题的回答,希望对您有帮助.
@利祁6423：如何选择合适的细胞核内参抗体?
宰舒19193495477…… Actin是细胞骨架的主要成分,具有高度保守性,在细胞中的表达相对稳定,广泛表达于真核细胞中,大小在42kDa-43kDa之间.研究发现Actin可以调控细胞收缩、调节细胞分裂、细胞器移动、花粉管顶端生长等活动,在植物的幼芽、生长组织、花基、萌发的种子和花序中均稳定表达. 选择合适的植物内参,首先考虑样本来源,植物样本需要选用植物细胞表达稳定的蛋白比如Actin或者Rubisco作为内参;其次要考虑目的蛋白的分子量大小,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量相差5kD以上,例如某植物目的蛋白大小在50kD左右,就可以选用Actin作为WB实验的内参;最后,从特异性、稳定性以及效价方面考虑,建议选用单克隆抗体更好一些.
@利祁6423：做western blot时怎么做beta actin -
宰舒19193495477…… 是的,β-actin 是管家基因编码的细胞骨架蛋白,表达量在细胞内相对稳定,很少受到其他因素的影响,因此常被选作实验内参
宰舒19193495477…… 定量或半定量PCR中内参的一种,全称是β-Actin
@利祁6423：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
宰舒19193495477…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@利祁6423：elisa需要actin对照吗 -
宰舒19193495477…… WB中会设置内参,Actin即肌动蛋白,是细胞的一种重要骨架蛋白.β-actin的蛋白水平通常不会发生改变,因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照.
@利祁6423：α - 珠蛋白可以做内参吗 -
宰舒19193495477…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD.1、如果是提取的总蛋白,然后2113做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公5261认的东西.2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜4102蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理1653细胞,比较处理前后某种膜蛋专白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混属杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@利祁6423：western blot内参抗体actin为什么出了好几条带 -
宰舒19193495477…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@利祁6423：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
宰舒19193495477…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
@利祁6423：康为世纪的Actin内参怎么样?有人用过么?
宰舒19193495477…… 可以啊,β-actin是一种持家蛋白,当然可以用作qPCR内参. 以上是对这个问题的回答,希望对您有帮助.
@利祁6423：如何选择合适的细胞核内参抗体?
宰舒19193495477…… Actin是细胞骨架的主要成分,具有高度保守性,在细胞中的表达相对稳定,广泛表达于真核细胞中,大小在42kDa-43kDa之间.研究发现Actin可以调控细胞收缩、调节细胞分裂、细胞器移动、花粉管顶端生长等活动,在植物的幼芽、生长组织、花基、萌发的种子和花序中均稳定表达. 选择合适的植物内参,首先考虑样本来源,植物样本需要选用植物细胞表达稳定的蛋白比如Actin或者Rubisco作为内参;其次要考虑目的蛋白的分子量大小,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量相差5kD以上,例如某植物目的蛋白大小在50kD左右,就可以选用Actin作为WB实验的内参;最后,从特异性、稳定性以及效价方面考虑,建议选用单克隆抗体更好一些.
@利祁6423：做western blot时怎么做beta actin -
宰舒19193495477…… 是的,β-actin 是管家基因编码的细胞骨架蛋白,表达量在细胞内相对稳定,很少受到其他因素的影响,因此常被选作实验内参
