actin内参条带大小
@长砌6434：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
聂希19120841204…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@长砌6434：western blot内参抗体actin为什么出了好几条带 -
聂希19120841204…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@长砌6434：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
聂希19120841204…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@长砌6434：做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? -
聂希19120841204…… 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
@长砌6434：如何选择合适的细胞核内参抗体?
聂希19120841204…… Actin是细胞骨架的主要成分,具有高度保守性,在细胞中的表达相对稳定,广泛表达于真核细胞中,大小在42kDa-43kDa之间.研究发现Actin可以调控细胞收缩、调节细胞分裂、细胞器移动、花粉管顶端生长等活动,在植物的幼芽、生长组织、花基、萌发的种子和花序中均稳定表达. 选择合适的植物内参,首先考虑样本来源,植物样本需要选用植物细胞表达稳定的蛋白比如Actin或者Rubisco作为内参;其次要考虑目的蛋白的分子量大小,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量相差5kD以上,例如某植物目的蛋白大小在50kD左右,就可以选用Actin作为WB实验的内参;最后,从特异性、稳定性以及效价方面考虑,建议选用单克隆抗体更好一些.
@长砌6434：如何用actin基因检测反转录结果,具体点,谢谢... -
聂希19120841204…… 1.要有你的反转录产物2.要设计或者有可以pcr扩增actin基因的引物3.用一般pcr的方法,以你的反转录产物为模板,用扩增actin的引物进行pcr扩增4.扩增完之后跑电泳检测,看条带大小,最好再测序验证一下,是否为目的片段 如果扩出来了,即能证明你的反转录没有问题,可以用反转录产物做别的实验了
@长砌6434：用actin基因检测反转录结果,是怎么操作?具体点,谢谢... -
聂希19120841204…… Actin是管家基因,在任何组织和任何发育阶段表达量都是恒定的,所以我们用Actin来检测反转录时RNA有没有问题,以及反转录的目的基因表达量如何.所以你要用actin的话,你需要先设计一对actin的引物,然后用actin的引物去跑RT-PCR,如果电泳Actin条带,那么你再用同样的RNA或者cDNA模板做RT-PCR,这样你的结果就是可靠的.
@长砌6434：Western Blot为什么必须要用内参 -
聂希19120841204…… 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
@长砌6434：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
聂希19120841204…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
聂希19120841204…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@长砌6434：western blot内参抗体actin为什么出了好几条带 -
聂希19120841204…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@长砌6434：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
聂希19120841204…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@长砌6434：做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? -
聂希19120841204…… 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
@长砌6434：如何选择合适的细胞核内参抗体?
聂希19120841204…… Actin是细胞骨架的主要成分,具有高度保守性,在细胞中的表达相对稳定,广泛表达于真核细胞中,大小在42kDa-43kDa之间.研究发现Actin可以调控细胞收缩、调节细胞分裂、细胞器移动、花粉管顶端生长等活动,在植物的幼芽、生长组织、花基、萌发的种子和花序中均稳定表达. 选择合适的植物内参,首先考虑样本来源,植物样本需要选用植物细胞表达稳定的蛋白比如Actin或者Rubisco作为内参;其次要考虑目的蛋白的分子量大小,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量相差5kD以上,例如某植物目的蛋白大小在50kD左右,就可以选用Actin作为WB实验的内参;最后,从特异性、稳定性以及效价方面考虑,建议选用单克隆抗体更好一些.
@长砌6434：如何用actin基因检测反转录结果,具体点,谢谢... -
聂希19120841204…… 1.要有你的反转录产物2.要设计或者有可以pcr扩增actin基因的引物3.用一般pcr的方法,以你的反转录产物为模板,用扩增actin的引物进行pcr扩增4.扩增完之后跑电泳检测,看条带大小,最好再测序验证一下,是否为目的片段 如果扩出来了,即能证明你的反转录没有问题,可以用反转录产物做别的实验了
@长砌6434：用actin基因检测反转录结果,是怎么操作?具体点,谢谢... -
聂希19120841204…… Actin是管家基因,在任何组织和任何发育阶段表达量都是恒定的,所以我们用Actin来检测反转录时RNA有没有问题,以及反转录的目的基因表达量如何.所以你要用actin的话,你需要先设计一对actin的引物,然后用actin的引物去跑RT-PCR,如果电泳Actin条带,那么你再用同样的RNA或者cDNA模板做RT-PCR,这样你的结果就是可靠的.
@长砌6434：Western Blot为什么必须要用内参 -
聂希19120841204…… 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
@长砌6434：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
聂希19120841204…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
