加入iptg的作用
@龚倪4538：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
匡尚15088767216…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@龚倪4538：大肠杆菌乳糖操纵子调控机理 -
匡尚15088767216…… 大肠杆菌乳糖操纵子包括4类基因:①结构基因,能通过转录、翻译使细胞产生一定的酶系统和结构蛋白,这是与生物性状的发育和表型直接相关的基因.乳糖操纵子包含3个结构基因:lacZ、lacY、lacA.LacZ合成β—半乳糖苷酶,lacY合成透过...
@龚倪4538：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
匡尚15088767216…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@龚倪4538：操纵子的作用是什么? -
匡尚15088767216…… 操纵子(operon):指启动基因、终止基因和一系列紧密连锁的结构基因的总称.原核生物大多数基因表达调控是通过操纵子机制实现的.操纵子通常由 2个以上的编码序列与启动序列、操纵序列以及其他调节序列在基因组中成簇串联组成.启...
@龚倪4538：标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么? -
匡尚15088767216…… 质粒上有两个或两个以上标记基因是为了使用方便.而且两个标记基因的功能是不一样的.比如我们最常用的PUC18/19等,一个是氨苄抗性,另一个是LAC Z基因. 前一个基因的存在,让我们在培养时加入氨苄可以让细菌时刻把这个质粒带着,如果不加氨苄,细菌肯定会把这个质粒丢掉的(毕竟质粒相对于细胞来说是一个包袱,但当氨苄存在时,如果细菌把质粒丢了,细菌便不能抗氨苄而被杀死). 而LAC Z基因是为我们插入目的基因筛选而用的.LAC Z基因本身在IPTG和x-gal的作用下,而产生兰斑.而且这个基因上有很多的酶切位点,方便我们插入自己想要的基因.而我们的基因插入后,把LAC Z基因破坏了,不能产生兰斑.这就是兰白斑筛选.
@龚倪4538：IPTG是什么?哪里有卖?质量怎么样? -
匡尚15088767216…… 去欣淘商城,里面全是知名品牌.
匡尚15088767216…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@龚倪4538：大肠杆菌乳糖操纵子调控机理 -
匡尚15088767216…… 大肠杆菌乳糖操纵子包括4类基因:①结构基因,能通过转录、翻译使细胞产生一定的酶系统和结构蛋白,这是与生物性状的发育和表型直接相关的基因.乳糖操纵子包含3个结构基因:lacZ、lacY、lacA.LacZ合成β—半乳糖苷酶,lacY合成透过...
@龚倪4538：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
匡尚15088767216…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@龚倪4538：操纵子的作用是什么? -
匡尚15088767216…… 操纵子(operon):指启动基因、终止基因和一系列紧密连锁的结构基因的总称.原核生物大多数基因表达调控是通过操纵子机制实现的.操纵子通常由 2个以上的编码序列与启动序列、操纵序列以及其他调节序列在基因组中成簇串联组成.启...
@龚倪4538：标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么? -
匡尚15088767216…… 质粒上有两个或两个以上标记基因是为了使用方便.而且两个标记基因的功能是不一样的.比如我们最常用的PUC18/19等,一个是氨苄抗性,另一个是LAC Z基因. 前一个基因的存在,让我们在培养时加入氨苄可以让细菌时刻把这个质粒带着,如果不加氨苄,细菌肯定会把这个质粒丢掉的(毕竟质粒相对于细胞来说是一个包袱,但当氨苄存在时,如果细菌把质粒丢了,细菌便不能抗氨苄而被杀死). 而LAC Z基因是为我们插入目的基因筛选而用的.LAC Z基因本身在IPTG和x-gal的作用下,而产生兰斑.而且这个基因上有很多的酶切位点,方便我们插入自己想要的基因.而我们的基因插入后,把LAC Z基因破坏了,不能产生兰斑.这就是兰白斑筛选.
@龚倪4538：IPTG是什么?哪里有卖?质量怎么样? -
匡尚15088767216…… 去欣淘商城,里面全是知名品牌.
